Ezrin蛋白表達(dá)對鼻咽癌患者根治性治療預(yù)后的預(yù)測價值.pdf

1、1.研究背景: 鼻咽癌為我國常見的惡性腫瘤之一，我國的鼻咽癌發(fā)病人數(shù)占世界總數(shù)的80﹪左右。目前，放射治療仍是最有效的治療手段。5年生存率達(dá)到5096-60﹪。遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和局部復(fù)發(fā)已經(jīng)成為治療失敗的主要原因。而一直以來，預(yù)測初治鼻咽癌患者預(yù)后的因素往往局限在部分臨床指標(biāo)上，包括男性、有無顱神經(jīng)侵犯、疾病臨床分期早晚、雙側(cè)淋巴結(jié)侵犯大小以及患者治療效果等，但實際中，臨床預(yù)后指標(biāo)相同的病人也常常表現(xiàn)出不同的疾病轉(zhuǎn)歸，有的長期隨訪無疾病

2、進(jìn)展，有的治療結(jié)束后較短時間內(nèi)出現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移，這就提示我們腫瘤個體生物學(xué)差異是影響預(yù)后的重要因素之一。但到目前為止，尚未發(fā)現(xiàn)臨床適用的，可預(yù)測鼻咽癌轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的生物學(xué)指標(biāo)。 長期研究中人們發(fā)現(xiàn)腫瘤轉(zhuǎn)移是基因調(diào)控下的多階段、多因素的極為復(fù)雜的病理過程。而近年來，與腫瘤轉(zhuǎn)移過程高度相關(guān)的蛋白及基因已成為腫瘤轉(zhuǎn)移機制研究領(lǐng)域的熱點，因為這些蛋白及基因不但使我們可以更深入的了解腫瘤轉(zhuǎn)移的機理，更重要的是，它們有可能成為預(yù)測腫瘤患者預(yù)后的指

3、標(biāo)，并成為抗腫瘤轉(zhuǎn)移的靶點，為人類攻克腫瘤難題帶來希望。 Ezrin蛋白就是被發(fā)現(xiàn)與腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移密切相關(guān)的蛋白分子之一。已有研究證實它在多種腫瘤組織中表達(dá)，其中大部分與患者不良預(yù)后相關(guān)。 Ezrin蛋白是連接于細(xì)胞膜和細(xì)胞骨架之間的ERM 蛋白家族(Ezrin，Radixin，Moesin，Merlin)成員之一，即是一種將細(xì)胞膜分子(如CD44、E-cadherin、ICAM22)與肌動蛋白-細(xì)胞骨架連接起來的橋接蛋白。這種連

4、接，不但是結(jié)構(gòu)上的，而且是功能上的。通過介導(dǎo)細(xì)胞膜與細(xì)胞骨架的連接，ezrin( ERM 家族) 在細(xì)胞的運動、遷移、有絲分裂和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等生理功能中發(fā)揮重要作用。 Yu 等和Khanna 等在兩個獨立的研究中，均采用了基因芯片這種大通量篩查差異基因表達(dá)的方法，并選用了兩種間葉來源腫瘤的、高低轉(zhuǎn)移能力各不相同的細(xì)胞系作為實驗對象。通過運用不同的數(shù)據(jù)處理方法，共同發(fā)現(xiàn)了ezrin這種與腫瘤轉(zhuǎn)移高度相關(guān)的蛋白。Yu等將vi12基因(e

5、zrin編碼基因)轉(zhuǎn)入低轉(zhuǎn)移能力的細(xì)胞系，發(fā)現(xiàn)原來不會轉(zhuǎn)移的腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力大大提高，很容易形成肺轉(zhuǎn)移灶，這說明ezrin蛋白的過表達(dá)可賦予腫瘤細(xì)胞高轉(zhuǎn)移活性。更重要的是，在這兩個研究中，都采用了諸如RNA干擾、發(fā)夾RNA、反義RNA等抑制ezrin表達(dá)的方法，結(jié)果兩組研究均顯示，在抑制了ezrin的表達(dá)后，原本具有高轉(zhuǎn)移能力的細(xì)胞系轉(zhuǎn)移能力大大下降，不能形成肉眼轉(zhuǎn)移灶。這些實驗結(jié)果表明，ezrin 不但足以導(dǎo)致腫瘤轉(zhuǎn)移，而且對于腫瘤轉(zhuǎn)

6、移是必不可少的。 Ezrin 是否在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮核心作用，目前尚不得而知，但是它參與多種不同來源腫瘤轉(zhuǎn)移的事實，已通過大量實驗得以證實．在大規(guī)模隨訪的基礎(chǔ)上，利用實時定量PCR的方法，研究ezrin與骨肉瘤行保肢手術(shù)患者生存期之間的關(guān)系。初步結(jié)果顯示，ezrin 的表達(dá)與患者生存期存在一定程度的負(fù)相關(guān)關(guān)系。并且在婦科腫瘤、胰腺癌、黑色素瘤、肺癌、高度惡性軟組織肉瘤、食管癌等腫瘤中，ezrin的過量表達(dá)已被證實與腫瘤的轉(zhuǎn)移有

7、關(guān)。但有關(guān)Ezrin在鼻咽癌組織中的表達(dá)及其對腫瘤生物學(xué)行為的影響的文獻(xiàn)報道很少。 本實驗旨在探討ezrin蛋白在鼻咽癌組織中的表達(dá)，深入研究ezrin表達(dá)水平與患者轉(zhuǎn)移和無病生存的關(guān)系，從臨床應(yīng)用角度探索ezrin 成為鼻咽癌復(fù)發(fā)或者轉(zhuǎn)移的分子標(biāo)志物的價值。 2．方法: 2.1臨床資料 回顧性研究中山大學(xué)腫瘤防治中心1999年1月至2003年1月鼻咽癌根治治療結(jié)束獲完全緩解病例105例，病理診斷均為鼻咽

8、未分化型非角化癌。搜集臨床資料：性別、年齡、EBV感染血清學(xué)指標(biāo)、臨床分期、治療情況等。隨訪患者預(yù)后，結(jié)果包括了發(fā)生轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)的患者51例，無轉(zhuǎn)移54例。 2.2免疫組化 我院病理科標(biāo)本庫搜集對應(yīng)標(biāo)本；采用免疫組化SP法檢測隨訪患者原發(fā)病灶中ezrin表達(dá)情況，對組織表達(dá)情況評分。 2.3整理數(shù)據(jù) 統(tǒng)計分析應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件包進(jìn)行統(tǒng)計。Ezrin不同表達(dá)水平與患者隨訪過程中出現(xiàn)轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)等預(yù)后

9、的相關(guān)性采用Spearman 等級相關(guān)分析及等級秩和檢驗。Ezrin蛋白表達(dá)與隨訪的患者無病生存時間的關(guān)聯(lián)性采用Kaplan-Mcicr法分析及制圖。分期及病毒血清學(xué)滴度不同的兩組間ezrin表達(dá)差異比較采用x<'2>檢驗。多因素對預(yù)后的影響采用Cox回歸模型分析。 3．結(jié)果: 3.1 Ezrin蛋白表達(dá)與隨訪期間發(fā)生轉(zhuǎn)移的關(guān)系 Ezrin強陽性、陽性表達(dá)的患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率(分別為66.6﹪，52.8﹪)顯著高于e

10、zrin陰性的患者的轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)率(24.2﹪)，并且出現(xiàn)轉(zhuǎn)移的患者相對于無疾病生存的患者，存在更高幾率的ezrin蛋白過表達(dá)。 3.2 Ezrin蛋白表達(dá)與無病生存時間的關(guān)系 Ezrin蛋白陰性表達(dá)的患者平均無病生存時間65個月；陽性表達(dá)平均無病生存時間約49月；而ezrin強陽性表達(dá)患者平均無病生存時間為39月。三組患者無病生存率比較，總體差異顯著，其中異常表達(dá)組的生存時間短于陰性組，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.

11、3 Ezrin蛋白表達(dá)與患者總生存率的關(guān)系 在隨訪結(jié)束后我們共獲得了75例患者長期(5年或以上)生存資料，這些患者腫瘤組織ezrin陰性表達(dá)24例，死亡6例，5年總生存率75﹪；陽性表達(dá)25例，死亡10例，5年總生存率約60﹪；而ezrin強陽性表達(dá)26例中死亡14例，5年總生存率46﹪。其中ezrin強表達(dá)組的總生存率明顯低于陰性組，兩組差異有統(tǒng)計學(xué)意義。 3.4 輔助治療對ezrin蛋白表達(dá)與轉(zhuǎn)移關(guān)系的影響

12、在未接受過放療以外的輔助治療的人群中，ezrin異常表達(dá)的患者遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率仍顯著高于ezrin陰性的患者(58.8﹪Vs.20.8﹪)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。對于采取聯(lián)合放化療的綜合治療策略的患者，盡管就遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移率而言，ezrin異常表達(dá)的患者組仍高于無表達(dá)組，但差異己無統(tǒng)計學(xué)意義。 3.5 Ezrin蛋白表達(dá)與臨床分期、EB病毒血清學(xué)指標(biāo)的關(guān)系 Ezrin蛋白異常表達(dá)與患者臨床疾病分期以及EB病毒血清學(xué)標(biāo)志包括EBVDNA-

13、Ab中和率、VCA-IgA、EA-IgA滴度無明顯相關(guān)性。但我們發(fā)現(xiàn)，臨床局部晚期(Ⅲ，Ⅳa期)合并腫瘤組織ezrin蛋白陰性表達(dá)的25例病例在隨訪中有24﹪發(fā)生了遠(yuǎn)處器官轉(zhuǎn)移(6/25)；相對比的是，晚期且腫瘤內(nèi)ezrin高表達(dá)的30例在隨訪中有67﹪出現(xiàn)了局部復(fù)發(fā)或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(20/30)，兩者差異顯著。 3.6 影響患者無病生存時間的多因素分析 采用Cox回歸模型對可能影響患者無病生存的多個因素進(jìn)行分析，這些因素包括

14、年齡、TNM分期、T分期、N分期、EB病毒血清學(xué)標(biāo)志EN-Ab、VCA-IgA以及ezrin蛋白。結(jié)果ezrin蛋白表達(dá)與患者無病生存具有獨立相關(guān)性(P<0.05)。 4．結(jié)論: 4.1 腫瘤組織中ezrin蛋白的異常表達(dá)與鼻咽癌患者治療結(jié)束后發(fā)生復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移及生存時間相關(guān)，通過對腫瘤組織中該蛋白的免疫組化檢測有可能預(yù)測患者預(yù)后。 4.2 輔助治療，特別是1-3個療程的化療對ezrin異常表達(dá)患者不良預(yù)后有一定的干預(yù)