胚胎干細胞來源的視網(wǎng)膜前體細胞眼內移植及致瘤性的研究.pdf

1、視網(wǎng)膜變性是一類伴隨著視網(wǎng)膜細胞的壞死或凋亡的病變的總稱。但目前，這類疾病尚沒有有效的治療手段。所以，任何能夠防止這些病變的發(fā)生或能幫助視網(wǎng)膜重建的方法都可能成為臨床上有效的治療措施。
　　雖然已有的報道證實了來自胎兒的視網(wǎng)膜前體細胞(retinal progenitor cells，RPCs)移植治療視網(wǎng)膜變性類疾病的安全性和有效性，但是其來源始終限制了其應用。胚胎干細胞(embryonic stem cells，ESCs)是胚

2、胎著床前囊胚期的內細胞團在體外特定培養(yǎng)條件下建立的細胞系，具有自我更新的能力和發(fā)育全能性的特點。ESCs能夠分化成為各種類型的細胞，這使得它們具有巨大的研究價值，為臨床提供了充足的細胞來源。但同時，ESCs持續(xù)的自我更新能力和發(fā)育全能性，也使得細胞分化的高效性和細胞移植的安全性特別引起人們的關注。我的課題也是基于此，探討了胚胎干細胞移植治療中的相關問題。
　　首先，通過流式細胞分選，我們富集到Soxl陽性的神經(jīng)上皮細胞，提高了進一

3、步向視網(wǎng)膜方向分化的效率。同時，去除了分化細胞中未分化的ESCs的污染，避免了畸胎瘤的產(chǎn)生。但是，在61％的細胞移植組中，我們發(fā)現(xiàn)了過度增殖的神經(jīng)組織（neural overgrowth，NOG）。于是，我們通過全轉錄本芯片的檢測，發(fā)現(xiàn)canonical Wnt通路在ESC-RPCs中的異常激活。同時，我們的實驗證明通過抑制canonical Wnt通路，能夠顯著的促進ESC-RPCs進一步成熟，并使NOG的比率降低至3％。組織免疫組化

4、和視網(wǎng)膜電生理檢測結果表明，抑制canonical Wnt通路后ESC-RPCs能夠有效的整合到宿主視網(wǎng)膜中，形成突觸連接，并且?guī)椭拗骰謴鸵暪δ堋?br>　　我們針對canonical Wnt通路對ESC-RPCs的分化和致瘤性的調控作用及其機制進行了深入的研究。結果表明，canonical Wnt通路可能通過調控Tcf1，影響Sox2和Nestin的表達水平并最終參與分化和腫瘤形成的調控。當我們在ESC-RPCs中，沉默Sox2和N