傷寒和甲型副傷寒沙門菌L型的體外膽汁誘導(dǎo)及其感染膽囊的病原學(xué)診斷.pdf

1、目的：研究人膽汁對傷寒及甲型副傷寒沙門菌L型的誘導(dǎo)作用，探討膽囊攜帶傷寒和甲型副傷寒沙門菌 L型的流行病學(xué)意義及其感染的病原學(xué)診斷方法。
　　方法：將傷寒和甲型副傷寒沙門菌分別接種無菌的人膽汁內(nèi)，置37℃培養(yǎng)。分別在不同時間段，以常規(guī)細(xì)菌學(xué)方法分離傷寒、副傷寒沙門菌，同時以非高滲分離培養(yǎng)法分離L型并傳代培養(yǎng)獲得穩(wěn)定 L型，觀察膽汁誘導(dǎo)的傷寒、副傷寒沙門菌L型的形態(tài)、革蘭染色性及細(xì)胞壁染色，檢測傷寒、副傷寒沙門菌L型的生化反應(yīng)活性。

2、采用傷寒和副傷寒沙門菌特異性基因fliC-d、filC-a、invA，以多重聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)、瓊脂糖凝膠電泳及核苷酸序列測定方法，鑒定傷寒沙門菌和甲型副傷寒沙門菌L型。
　　結(jié)果：膽汁誘導(dǎo)傷寒沙門菌48小時、甲型副傷寒沙門菌6小時之后，誘導(dǎo)物經(jīng)常規(guī)細(xì)菌學(xué)方法分離培養(yǎng)未檢出細(xì)菌型。經(jīng)膽汁培養(yǎng)1小時至45天，在不同時間間隔進(jìn)行非高滲培養(yǎng)基分離培養(yǎng)，可持續(xù)檢出細(xì)菌L型。傷寒和甲型副傷寒沙門菌 L型細(xì)胞均為圓球或近似圓球的形態(tài)，多以單個、成

3、雙、成堆排列；革蘭染色、細(xì)胞壁染色陰性，生化反應(yīng)陰性。多重PCR擴(kuò)增產(chǎn)物顯示，傷寒以及甲型副傷寒穩(wěn)定 L型分別具有同其親代細(xì)菌型一致的fliC-d、fliC-a和invA基因核苷酸片段，傷寒沙門菌L型凝膠電泳條帶分別為750bp和284bp；甲型副傷寒沙門菌L型凝膠電泳條帶分別為329bp和284bp，核酸序列測定結(jié)果顯示，傷寒沙門菌和甲型副傷寒沙門菌L型的fliC-d、fliC-a和 invA基因核苷酸序列組成與其親代細(xì)菌型的相似率為

4、99％。
　　結(jié)論：根據(jù)本文研究結(jié)果，我們獲得以下結(jié)論：1、傷寒和甲型副傷寒沙門菌在人膽汁內(nèi)可迅速喪失細(xì)胞壁和成為L型，造成膽汁中傷寒和甲型副傷寒的常規(guī)細(xì)菌學(xué)分離培養(yǎng)陰性。2、傷寒和甲型副傷寒沙門菌 L型可在人膽汁內(nèi)較長時間攜帶，使之成為潛在的病原菌，可能與慢性膽囊炎和膽囊結(jié)石的發(fā)生和發(fā)展有關(guān)，具有重要的流行病學(xué)意義。3、膽汁誘導(dǎo)的傷寒和甲型副傷寒L型可用非高滲分離培養(yǎng)法分離培養(yǎng)，分離的L型可用傷寒及甲型副傷寒的特異性基因進(jìn)行多重