間日瘧原蟲疫苗候選分子PvMSP1對(duì)樹突狀細(xì)胞分化成熟和功能的影響.pdf

1、目的：（1）觀察間日瘧原蟲疫苗候選分子PvMSP1（Plasmodiumvivaxmerozoite surface protein1）對(duì)樹突狀細(xì)胞（dendritic cell, DC）分化成熟和功能的影響；（2）探討PvMSP1通過(guò)TLR（Toll Like Receptors）通路活化DC的作用。
　　方法：（1）將重組表達(dá)質(zhì)粒PET28a-PvMSP1轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21(DE3+)中，IPTG誘導(dǎo)表達(dá)PvMSP1重組蛋

2、白，Ni柱親和層析純化重組蛋白，快速液相蛋白層析分離系統(tǒng)（FPLC）進(jìn)一步純化并檢測(cè)其純度，SDS-PAGE電泳驗(yàn)證目的蛋白；（2）用健康成人外周血分離單核細(xì)胞，在細(xì)胞因子IL-4、GM-CSF的作用下獲得未成熟DC（immature DC, imDC）；（3）用不同劑量的PvMSP1（1.0μg/ml、10.0μg/ml、100.0μg/ml）分別誘導(dǎo)imDC繼續(xù)分化；（4）流式細(xì)胞術(shù)分析不同處理的DC表面成熟性相關(guān)分子CD83、CD

3、86、HLA-DR的變化；（5）ELISA檢測(cè)DC培養(yǎng)上清中IL-10、IL-12的表達(dá)水平；（6）RT-PCR檢測(cè)DC TLR4、TLR9 mRNA的表達(dá)水平；（7）MTT法檢測(cè)DC誘導(dǎo)自體淋巴細(xì)胞增殖的能力。
　　結(jié)果：（1）獲得了PvMSP1重組蛋白，其蛋白純度達(dá)94％；（2）外周血單核細(xì)胞能在IL-4、GM-CSF的誘導(dǎo)下分化為imDC，細(xì)胞具有典型的DC特征性形態(tài)；LPS能夠誘導(dǎo)DC成熟，其表面成熟性分子CD83、CD8

4、6、HLA-DR的表達(dá)均增加；（3）PvMSP1對(duì)DC表型的影響：與未刺激組比較，PvMSP1誘導(dǎo)組CD83、CD86、HLA-DR的表達(dá)均明顯增高（p<0.01, p<0.05, p<0.05），但其不同劑量組各表型的表達(dá)均無(wú)明顯變化（p>0.05）；（4）DC細(xì)胞因子IL-10、IL-12的表達(dá)水平：與未刺激組比較，LPS誘導(dǎo)組IL-10、IL-12的表達(dá)量均明顯增加（p<0.01）， PvMSP1誘導(dǎo)組IL-10、IL-12的表達(dá)

5、量也均明顯增加（p<0.05，p<0.01），但其不同劑量組IL-10、IL-12的表達(dá)量均無(wú)明顯變化（p>0.05）；（5）DC TLR4、TLR9 mRNA的表達(dá)水平：與未刺激組比較，PvMSP1誘導(dǎo)組DC TLR4 mRNA的表達(dá)均明顯增加（p<0.01），TLR9 mRNA的表達(dá)均無(wú)明顯變化（p>0.05），但其不同劑量組TLR4、TLR9 mRNA的表達(dá)也均無(wú)明顯變化；與PvMSP1各劑量組比較，LPS誘導(dǎo)組TLR4 mRNA