三種蛋白水解物對成骨細(xì)胞的促增殖和抗凋亡作用.pdf

1、骨質(zhì)疏松癥是一種多因素所致的慢性疾病，其病因與年齡、雌激素下降、營養(yǎng)失調(diào)、免疫以及遺傳等多方面因素有關(guān)，其癥狀主要表現(xiàn)是骨密度降低、骨組織微觀結(jié)構(gòu)的破壞。傳統(tǒng)的骨質(zhì)疏松類藥物如鍶制劑、護骨素等有一定的療效;但是臨床治療中藥物的使用劑量、合理配伍及藥物的副作用仍然困擾著人們。因此研究和開發(fā)無副作用、促骨骼健康的食品原料尤為重要。蛋白質(zhì)和氨基酸是骨內(nèi)有機質(zhì)合成的必不可少的原料，蛋白質(zhì)的長期缺乏可導(dǎo)致骨基質(zhì)合成的降低，最終引發(fā)骨質(zhì)疏松癥。另一

2、方面，高蛋白的攝入同樣不利于骨健康，會導(dǎo)致過多的鈣流失和骨吸收，最終抑制骨的礦化。因此食品蛋白質(zhì)與骨健康之間的關(guān)系需要充分研究和評估。
　　本研究采用鮭魚皮明膠、大豆蛋白和酪蛋白，經(jīng)木瓜蛋白酶水解后，得到三種不同水解程度的明膠水解物、大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物，并評估九種水解物對人成骨細(xì)胞hFOB1.19的細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期循環(huán)和凋亡的影響。CCK-8實驗結(jié)果表明，明膠水解物、大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物對成骨細(xì)胞均具有明確的增

3、殖促進(jìn)作用，細(xì)胞活性分別增加到103％-134％、104％-123％和100％-114％，水解物的水解度高，增殖促進(jìn)作用大。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果分析表明，明膠水解物、大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物均可不同程度的加速細(xì)胞周期循環(huán)，S期細(xì)胞比例分別由50.5％提高到67.4％、60.5％和56.5％，這一結(jié)果進(jìn)一步證實了三種蛋白水解物對成骨細(xì)胞的增殖促進(jìn)作用。明膠水解物、大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物對依托泊苷和氟化鈉誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡也有拮抗作用。

4、凋亡預(yù)防試驗中，凋亡細(xì)胞比例由31.6％分別下降到13.6％、15.6％和22.6％（依托泊苷組），或者由19.5％分別下降到11.3％、12.4％和17.7％（氟化鈉組）。凋亡逆轉(zhuǎn)試驗中，明膠水解物和大豆蛋白水解物使成骨細(xì)胞凋亡比例由13.3％比例分別下降至11.8％和11.7％（依托泊苷組），或者由14.5％下降到12.4％和11.0％（氟化鈉組）。酪蛋白水解物對依托泊苷和氟化鈉誘導(dǎo)的成骨細(xì)胞凋亡未檢測出逆轉(zhuǎn)作用?？傮w上看，明膠水解

5、物對成骨細(xì)胞的增殖促進(jìn)和抗凋亡作用好于大豆蛋白水解物和酪蛋白水解物。
　　采用基因芯片技術(shù)和RT-PCR方法檢測和驗證明膠水解物對成骨細(xì)胞中基因的表達(dá)改變。分析結(jié)果表明，hFOB1.19細(xì)胞經(jīng)明膠水解物作用后，與細(xì)胞增殖，細(xì)胞周期循環(huán)和細(xì)胞凋亡相關(guān)的基因發(fā)生變化，其中，MPHOSPH1和PAK1LP1的表達(dá)倍數(shù)被上調(diào)，RPS6KA2、JNK1、JNK3和JNKK這四種基因的表達(dá)倍數(shù)均被下調(diào)。免疫蛋白印記法檢測JNK家族的蛋白變化，