水稻Sp1 11互作基因的克隆與功能鑒定.pdf

1、水稻假病斑基因Spl11(spotted leaf 11)能通過泛素降解作用，負(fù)調(diào)控細(xì)胞壞死及假病斑的形成。Spl11突變體在自然條件下形成假病斑，從而提高對(duì)稻瘟病菌和白葉枯病菌的抗性。為確定參與Spl11基因調(diào)控抑制細(xì)胞死亡和防御反應(yīng)過程的物質(zhì)，本研究通過酵母雙雜交體系，以SPL11為誘餌，篩選水稻cDNA文庫(kù)，獲得了8個(gè)互作蛋白SPINs：SPIN1-SPIN8。除SPIN6外，所有蛋白均與SPL11之間存在中度或強(qiáng)烈相互作用。BL

2、AST同源蛋白功能分析結(jié)果表明，SPIN1編碼一個(gè)含KH的RNA結(jié)合蛋白；SPIN2基因，編碼一個(gè)球蛋白重鏈；SPIN3編碼一個(gè)類MOM蛋白，可能與維持轉(zhuǎn)基因沉默有關(guān)；SPIN4編碼一個(gè)含有Rpr2/Rpp21(RPR)域的RNA P酶蛋白，SPIN1和SPIN4均與mRNA的前體剪接功能有關(guān)。SPIN5編碼一個(gè)類乙酰谷氨酸激酶蛋白；SPIN6編碼一個(gè)Rho-GTP激酶蛋白；SPIN7和SPIN8未檢索到相關(guān)功能。 本研究中我們

3、分別構(gòu)建了SPIN3、SPIN4、SPIN6基因的RNAi及超表達(dá)載體，并對(duì)功能進(jìn)行了鑒定。通過遺傳轉(zhuǎn)化及PCR鑒定共獲得了多個(gè)陽性后代：SPIN3轉(zhuǎn)基因RNAi陽性后代41個(gè)株系，超表達(dá)陽性后代6個(gè)株系；SPIN4轉(zhuǎn)基因RNAi陽性后代1個(gè)株系，超表達(dá)陽性后代2個(gè)株系；SPIN6轉(zhuǎn)基因RNAi后代46個(gè)株系，超表達(dá)陽性后代9個(gè)株系。對(duì)陽性后代進(jìn)行白葉枯病菌和稻瘟病菌抗性功能鑒定發(fā)現(xiàn)，RNAi株系中，僅SPIN4后代對(duì)白葉枯病菌抗性增強(qiáng)