熒光素酶體外監(jiān)測hTRAIL基因治療肺癌A549細(xì)胞的基因成像研究.pdf

1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文熒光素酶體外監(jiān)測hTRAIL基因治療肺癌A549細(xì)胞的基因成像研究姓名：趙納申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：影像醫(yī)學(xué)與核醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：崔建嶺20070301中文摘要性：Ad，粥hTRAⅢ以不同的感染復(fù)數(shù)感染A549細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后，用細(xì)胞裂解緩沖液裂解存活細(xì)胞，經(jīng)高速離心后取上清，加入含熒光素的檢測試劑后，應(yīng)用液閃計(jì)數(shù)儀檢測熒光素酶發(fā)光的液閃計(jì)數(shù)。52測定ad1uc感染A549細(xì)胞后熒光索酶活性：應(yīng)用Ad—luc以不

2、同的感染復(fù)數(shù)感染A549細(xì)胞，培養(yǎng)48小時(shí)后，用細(xì)胞裂解緩沖液裂解存活細(xì)胞，經(jīng)高速離心后取上清，加入含熒光素檢測試劑后，應(yīng)用液閃計(jì)數(shù)儀檢測熒光素酶發(fā)光的液閃計(jì)數(shù)。結(jié)果：l腺病毒感染力測定：AdEGFP轉(zhuǎn)染A549細(xì)胞48小時(shí)后，熒光逐漸達(dá)到最強(qiáng)，可觀測到的最低感染復(fù)數(shù)為01MOI，隨著MOI增大，染色陽性率逐漸增加，MOI=100時(shí)，陽性率達(dá)995％，說明運(yùn)用腺病毒載體可有效將目的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)入A549細(xì)胞中。2在以不同MOI的Ad1uch

3、TRAIL感染A549細(xì)胞48小時(shí)后，MTT結(jié)果顯示與對照相比各組細(xì)胞生長受到明顯抑制(p0。01)，隨著MOI增大，細(xì)胞生存能力逐漸降低。3流式細(xì)胞術(shù)分析發(fā)現(xiàn)，Ad1uchTRAⅡ，感染A549細(xì)胞48小時(shí)后，細(xì)胞膜上可檢燹4到hTRAIL的表達(dá)，且隨著MOI增大，hTRAIL的表達(dá)逐漸增多；Ad1uchTRAIL以不同MOI感染A549細(xì)胞后，均可檢測到明顯的細(xì)胞凋亡(pO01)，隨著MOI增大，細(xì)胞凋亡率呈上升趨勢：hTRAIL的