蒲公英代謝物的抗乳腺癌細(xì)胞MCF-7活性成分及其作用機(jī)理研究.pdf

1、乳腺癌是女性常見的癌癥之一。而蒲公英作為治療乳腺癌、乳腺增生等疾病的常見中藥,關(guān)于其抑制乳腺癌生長的有效成分的研究很有限。蒲公英中抑制乳腺癌細(xì)胞生長有效成分的發(fā)現(xiàn)對于治療乳腺癌有十分重要的意義。新的有效成分研究方法的開發(fā)和利用,也進(jìn)一步為未來其他中藥中有效化合物的探索提供了思路。
　　本研究首先利用了分段技術(shù)并結(jié)合中藥尿液藥理學(xué)尋找蒲公英中抑制乳腺癌細(xì)胞MCF-7的活性成分。實驗過程中,蒲公英提取物作用于正常大鼠后,取老鼠的尿液進(jìn)

2、行研究。獲取的尿液用半制備型的HPLC進(jìn)行分段,將不同時間點獲得的尿液分別分成11段進(jìn)行下一步的篩選。取分段后的尿液進(jìn)行MTT實驗,篩選出潛在的活性段。對活性段進(jìn)行UPLC-MS分析,查證這些活性段中可能存在的潛在活性成分。通過這個平臺發(fā)現(xiàn)了木犀草素,羽扇豆醇,蒲公英甾醇乙酸酯,蒲公英萜醇,咖啡酸等五種潛在活性成分。
　　然后,本研究對得到的五種潛在活性化合物進(jìn)行分析篩選。五種化合物分別取不同濃度作用于乳腺癌細(xì)胞MCF-7,并設(shè)置

3、時間梯度。MTT實驗結(jié)果表明,五種化合物對MCF-7細(xì)胞都有一定程度的抑制性,且表現(xiàn)為時間依賴性和濃度依賴性。此外,細(xì)胞周期試驗進(jìn)一步驗證MTT實驗結(jié)果。
　　最后,選擇木犀草素和羽扇豆醇對乳腺癌細(xì)胞MCF-7的抑制作用進(jìn)行進(jìn)一步研究,即采用基于氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(GC-MS)技術(shù)的細(xì)胞代謝組學(xué)方法結(jié)合傳統(tǒng)生物學(xué)實驗的方法來研究木犀草素和羽扇豆醇作用于MCF-7細(xì)胞的作用機(jī)理。本研究中對MCF-7細(xì)胞前處理的方法進(jìn)行了優(yōu)化,盡可能得

4、到多的代謝物進(jìn)而提高分析的準(zhǔn)確度。同時,對經(jīng)過前處理的細(xì)胞樣品進(jìn)行衍生化處理后,通過GC-MS分別對未加藥細(xì)胞和加藥細(xì)胞代謝物進(jìn)行指紋圖譜分析,進(jìn)一步應(yīng)用主成分分析(PCA)和偏最小二乘判別分析(PLS-DA)對代謝組學(xué)數(shù)據(jù)進(jìn)行多維統(tǒng)計分析。
　　木犀草素對乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞的抑制作用研究結(jié)果顯示,與未加藥細(xì)胞相比,加藥細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)D-Galactose、D-Ribose等10種對分類有顯著貢獻(xiàn)的代謝小分子物質(zhì)。結(jié)合藥物將細(xì)胞