版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡(jiǎn)介
1、缺氧誘導(dǎo)因子1α在食管鱗癌發(fā)病機(jī)制中的研究研究生:施瑞華導(dǎo)師:范欽和南京醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院研究背景:缺氧誘導(dǎo)因子是一類由異源二聚體組成的轉(zhuǎn)錄因子,在機(jī)體對(duì)缺氧適應(yīng)性調(diào)節(jié)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。缺氧誘導(dǎo)因子-1(HIF-1)是其亞型之一,缺氧條件下廣泛存在于哺乳動(dòng)物和人體內(nèi),介導(dǎo)缺氧反應(yīng)基因(HRG)的調(diào)控,產(chǎn)生生理效應(yīng)。缺氧誘導(dǎo)因子-1 α(HIF-1α)為HIF-1的氧調(diào)節(jié)亞單位,是其活性調(diào)節(jié)中心。研究發(fā)現(xiàn)HIF-1α在大多數(shù)惡性腫瘤中存在表
2、達(dá),可通過(guò)調(diào)節(jié)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)等表達(dá)誘導(dǎo)血管生成,參與腫瘤發(fā)生和發(fā)展。 目的: 1、觀察HIF-1α、VEGF在食管癌患者發(fā)生、發(fā)展不同階段中表達(dá)變化及其與微血管密度(MVD)和腫瘤臨床病理特征間的相關(guān)性。 2、觀察缺氧狀態(tài)下HIF-1α、VEGF在食管鱗癌細(xì)胞系Eca-109中的表達(dá)變化。 3、觀察HIF-1 α基因表達(dá)調(diào)控對(duì)食管鱗癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。 4、通過(guò)裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn),探
3、討HIF-1α基因表達(dá)調(diào)控對(duì)食管鱗癌生長(zhǎng)、侵襲等行為的影響。 方法: 1、采用免疫組化和原位雜交方法檢測(cè)42例食管正常上皮、40例食管鱗狀上皮不典型增生和67例食管鱗癌組織中HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表達(dá),分析在食管鱗癌發(fā)生、發(fā)展不同階段HIF-1α、VEGF表達(dá)變化;以CD3 1作為微血管密度(MVD)指標(biāo),分析(1)HIF-1α、VEGF表達(dá)與MVD的相關(guān)性;(2)HIF-1α、VEGF和MVD與腫瘤臨床
4、病理特征的相關(guān)性。 2、在正常氧分壓和低氧條件下Eca-109細(xì)胞傳代培養(yǎng),采用RT-PCR和Westem-Blot方法檢測(cè)HIF-1α mRNA和蛋白表達(dá)變化。 3、利用RNA干擾技術(shù)構(gòu)建重組質(zhì)粒pGCsi-H1-shHIF轉(zhuǎn)染Eca-109細(xì)胞:(1)通過(guò)RT-PCR及Western Blot觀察HIF-1 α基因沉默后Eca-109細(xì)胞株中HIF-1α、VEGF、HO-1、MMP-2、PTEN表達(dá);(2)流式細(xì)胞儀
5、分析HIF-1α基因沉默后Eca-109細(xì)胞生長(zhǎng)變化;(3)細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)觀察其增殖活力改變。 4、HIF-1α基因沉默后Eca-109細(xì)胞株和普通Eca-109細(xì)胞株植入裸鼠體內(nèi),對(duì)比觀察移植瘤生長(zhǎng)情況。 結(jié)果: 1、在食管正常鱗狀上皮-不典型增生上皮-鱗癌組織中HIF-lα、VEGF在mRNA和蛋白水平表達(dá)呈逐步升高趨勢(shì),MVD值顯著增加,組間差異明顯;鱗癌組織HIF-1α蛋白表達(dá)與VEGF蛋白表達(dá)呈正相關(guān),且
6、HIF-1α、VEGF蛋白表達(dá)與MVD值呈正相關(guān);鱗癌中HIF-lα、VEGF蛋白表達(dá)與腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和TNM分期正相關(guān)。 2、Eca-109細(xì)胞中HIF-1α mRNA水平在缺氧組較正常氧組明顯升高;VEGF mRNA的表達(dá)水平與王HIF-1αmRNA表達(dá)一致;HIF-1α蛋白水平在缺氧狀態(tài)下與正常氧狀態(tài)下相比無(wú)顯著差異。無(wú)論在正常氧還是缺氧狀態(tài)下HIF-1α蛋白的表達(dá)均存在磷酸化及去磷酸化兩種形式。 3、p
7、GCsi-H1-shHIF成功轉(zhuǎn)染Eca-109細(xì)胞,有效抑制HIF-1 α基因表達(dá)并穩(wěn)定傳代;伴隨HIF-1α基因沉默同時(shí)出現(xiàn)VEGF、HO-1、MMF-2、PTEN的蛋白表達(dá)均下降; HIF-1α基因沉默后Eca-109更多阻滯于G1/GO期,且細(xì)胞增殖活力較對(duì)照組明顯低下。 4、HIF-1α基因沉默.Eca-109細(xì)胞裸鼠移植瘤生長(zhǎng)較普通傳代Eca.109細(xì)胞移植瘤明顯緩慢,移植瘤中心出現(xiàn)明顯壞死,免疫組化提示移植瘤內(nèi)HI
8、F-1 α、VEGF、MVD顯著減少。 結(jié)論: 1、食管鱗癌發(fā)生過(guò)程中HIF-1α、VEGF表達(dá)和MVD增加,HIF-1α可能通過(guò)誘導(dǎo)vEGF表達(dá)、促進(jìn)腫瘤血管生成而在食管鱗癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用;食管鱗癌中HIF-1 α、VEGF高表達(dá),提示兩者有可能成為評(píng)價(jià)腫瘤惡性程度的指標(biāo)。 2、缺氧狀態(tài)下HIF-1α在食管鱗癌細(xì)胞Eca-109中有過(guò)表達(dá),主要表現(xiàn)在轉(zhuǎn)錄水平,同時(shí)伴有VEGF mRNA的表達(dá)增加。而缺氧
9、時(shí)HIF-1 α蛋白的表達(dá)水平雖然有升高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,HIF-1α蛋白在缺氧狀態(tài)下的調(diào)節(jié)機(jī)制可能發(fā)生在翻譯后修飾水平。 3、重組質(zhì)粒pGCsi-H1-shHIF轉(zhuǎn)染Eca-109細(xì)胞后能有效抑制其HIF-1α基因的表達(dá),導(dǎo)致Eca-109細(xì)胞增殖活力下降,多被阻滯于G1/GO期,提示HIF-1α可影響腫瘤細(xì)胞DNA的復(fù)制合成。HIF-1α上游基因PTEN在HIF-1 α基因表達(dá)受抑后也出現(xiàn)了一定程度的抑制,這表明在調(diào)控通路中
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 食管鱗癌中雄激素受體與缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達(dá)及其關(guān)系.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子1α在缺氧誘導(dǎo)喉鱗癌細(xì)胞化療耐藥中的調(diào)控作用及分子機(jī)制.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1a在尖銳濕疣發(fā)病中的作用及機(jī)制的研究.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子--1α調(diào)控SCF-c--kit途徑在肢端黑素瘤發(fā)病機(jī)制中的作用研究.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1α及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在宮頸鱗癌組織中的表達(dá).pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1α在膀胱癌中的初步研究.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子1α在口腔鱗癌中的表達(dá)及其與血管新生的相關(guān)性研究.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1α在胰腺癌中的靶向治療研究.pdf
- 胎盤組織缺氧誘導(dǎo)因子-1α與病態(tài)胎盤附著發(fā)病關(guān)系的研究.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子1在間歇性缺氧預(yù)處理心臟保護(hù)中的作用研究.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子1在缺氧糖尿病大鼠心肌中的表達(dá)及調(diào)節(jié).pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1a和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子在食管鱗癌細(xì)胞系ECa-109中的表達(dá)及其意義.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子1α基因多態(tài)性及其與食管鱗癌的臨床病理特點(diǎn)和血管生成的關(guān)系.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1α及其靶基因在新生兒缺氧性肺動(dòng)脈高壓發(fā)病機(jī)制中的作用探討.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1α在幼鼠腎間質(zhì)損傷中的表達(dá)及意義.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子1相關(guān)肽的活性及機(jī)制研究.pdf
- 類腫瘤干細(xì)胞標(biāo)記物及缺氧誘導(dǎo)因子-1α在口腔鱗癌中的表達(dá)及相關(guān)性研究.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)在病理性瘢痕形成中的作用.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1α在腎透明細(xì)胞癌中的表達(dá)及意義.pdf
- 缺氧誘導(dǎo)因子-1在腎間質(zhì)纖維化中的表達(dá)及意義.pdf
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論