苦膽鏈霉菌Streptomyces felleus的誘變選育及其對油菜菌核病的生物防治.pdf

1、油菜菌核病是一種世界性的真菌病害，嚴重影響著油菜生產(chǎn)，具有土傳和氣傳病害的特點，其病原為Sclerotinia sclerotiorum(Lib.) de Bary。本試驗通過對生防放線菌苦膽鏈霉菌Streptomyces felleus YJ1的誘變選育，以期尋求對油菜菌核病具有較高拮抗活性的突變菌株。同時，探究了出發(fā)菌株YJ1及高效突變菌株對油菜菌核病菌的抑制作用，并優(yōu)化了菌株的發(fā)酵條件;測定了拮抗放線菌對油菜抗病相關酶的影響，并進

2、行了室內(nèi)盆栽、離體葉片及大田防效等試驗，為生防菌的進一步開發(fā)利用提供了理論依據(jù)。其主要研究結果如下:
　　1.生防放線菌YJ1的誘變選育
　　利用紫外線、硫酸二乙酯(DES)及二者相結合的復合誘變對生防菌YJ1進行了誘變選育。比較這3種誘變方法的誘變效應，DES是菌株YJ1的最佳誘變劑。通過對突變菌株的搖瓶發(fā)酵篩選，最終得到2株對核盤菌菌絲生長抑制活性最大的突變菌株Y-60.16和Y-Y-13，抑菌率分別為89.55％、89

3、.09％，比出發(fā)菌株分別提高了11.55％、10.96％。突變菌株Y-60.16、Y-Y-13經(jīng)連續(xù)傳代10次，它們對病原菌的抑制活性無明顯變化，其遺傳穩(wěn)定性良好。
　　2.生防菌YJ1及其突變菌株對油菜菌核病菌的抑制作用
　　生防放線菌YJ1及突變菌株Y-60.16、Y-Y-13對油菜菌核病菌的拮抗帶寬分別為11.0 mm、12.3 mm、12.1 mm，其抑菌率分別為80.28％、89.55％、89.09％。這3株放線菌

4、能夠明顯抑制病菌產(chǎn)生菌核，甚至在病菌培養(yǎng)11d后仍有較高的抑制率，分別為79.05％、81.42％、76.28％。此外，這3株放線菌的無菌發(fā)酵液能夠抑制病菌菌核和子囊孢子的萌發(fā)，但隨著發(fā)酵液濃度的降低，其抑菌效果有所下降。
　　3.生防菌YJ1及其突變菌株發(fā)酵條件的優(yōu)化
　　為了提高生防放線菌YJ1及其突變菌株的發(fā)酵水平，經(jīng)單因素試驗和正交試驗對它們的發(fā)酵條件進行了優(yōu)化。菌株YJ1的較優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基組成為:玉米粉10g，硫酸銨

5、3 g，K2HPO40.75 g，MgSO40.75 g，NaCl0.5 g，F(xiàn)eSO40.01 g，蒸餾水1000 mL;理想發(fā)酵條件為:初始pH7.0，發(fā)酵溫度28℃，發(fā)酵時間4d，搖床轉速160 r/min。菌株Y-60.16的發(fā)酵培養(yǎng)基:玉米粉20 g，黃豆餅粉3 g，K2HPO40.25 g，MgSO40.5 g，NaCl0.5 g，F(xiàn)eSO40.01 g，蒸餾水1000 mL;理想發(fā)酵條件:初始pH7.0，發(fā)酵溫度28℃，發(fā)

6、酵時間5d，搖床轉速160 r/min。菌株Y-Y-13的發(fā)酵培養(yǎng)基;玉米粉20 g，硫酸銨1g，K2HPO40.5 g，MgSO40.75 g，NaCl0.5g，F(xiàn)eSO40.01 g，蒸餾水1000mL;理想發(fā)酵條件:初始pH7.0，發(fā)酵溫度28℃，發(fā)酵時間4d，搖床轉速160 r/min。
　　4.生防菌YJ1及其突變菌株能提高油菜抗病相關醇的活性
　　生防放線菌YJ1及突變菌株Y-60.16、Y-Y-13能夠顯著提高

7、油菜SOD、POD、PPO和PAL的活性。這幾種酶的變化無明顯的數(shù)量關系，并且隨時間變化的規(guī)律也不相同，尤其是在處理4d后這幾種酶的活性都保持在較高水平。由此可知，誘導油菜的系統(tǒng)抗性可能是這幾株菌的生防機制之一。
　　5.生防菌YJ1及其突變菌株的防病效果
　　室內(nèi)試驗結果表明，放線菌發(fā)酵液用于浸種、灌根或浸根、噴霧以及油菜離體葉片試驗，都能夠顯著控制油菜病菌病斑的擴展。其中，菌株YJ1、Y-60.16和Y-Y-13發(fā)酵液噴