慢性EAE模型C57BL-6小鼠和脾中Foxp3表達(dá)的研究.pdf

1、目的：運(yùn)用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測(cè)定Foxp3在慢性EAE模型C57BL/6小鼠腦和脾組織中的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化，并用TGF-β1進(jìn)行干預(yù)，觀察其變化，以探討表達(dá)FoxP3的CD4<'+>CD25<'+>Tr細(xì)胞在慢性EAE病程中的作用。 方法：72只近交系無(wú)特定病原體(SPF)級(jí)8-10周健康雌性C57BL/6J小鼠，體重18-22克，隨機(jī)分為佐劑組、致病組、干預(yù)組、干預(yù)對(duì)照組。各組小鼠又分為發(fā)病初、發(fā)病高峰和慢性期組。

2、用人工合成的MOG35-55和自制的完全弗氏佐劑免疫C57BL/6J小鼠制成慢性EAE動(dòng)物模型，每只小鼠注射0.2ml.，其中含人工合成的MOG35-55 300 μ g，完全福氏佐劑2mg，分4點(diǎn)皮下注射，基礎(chǔ)免疫1周后用同樣劑量加強(qiáng)免疫一次；免疫當(dāng)天和48小時(shí)后經(jīng)腹腔注射百日咳毒素200ng。干預(yù)組在免疫同時(shí)，每只小鼠注射1 μ g TGF-β1/100 μ LPBS，分兩次皮下注射，注射時(shí)間，0，3，5，6，8，9，11天多點(diǎn)s.

3、c。干預(yù)對(duì)照組在免疫同時(shí)注入PBS，方法和劑量同干預(yù)組。免疫當(dāng)天定為第0天起，至第32天實(shí)驗(yàn)終止前，每天8AM-8PM觀察動(dòng)物行為活動(dòng)，采用盲法，每天2人至少一次在同一時(shí)間稱體重并按Benson評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)做EAE嚴(yán)重性的臨床評(píng)估.RT-PCR技術(shù)觀察佐劑對(duì)照組、致病組、干預(yù)對(duì)照組、干預(yù)組發(fā)病初、發(fā)病高峰和慢性期組腦組織Foxp3 mRNA的表達(dá)變化。 結(jié)果： 1，動(dòng)物模型： 慢性EAE致病組累計(jì)發(fā)病率為83.3﹪，

4、死亡率為11﹪，在第一次免疫后14-20天發(fā)病，20-24天達(dá)高峰，28-32天緩解，發(fā)病小鼠體重明顯減輕；干預(yù)組體重減輕，發(fā)病率增加達(dá)88.9﹪，死亡率為10﹪，13-17天發(fā)病，17-22天到達(dá)高峰，更易趨于緩解。干預(yù)對(duì)照組發(fā)病時(shí)間和評(píng)分基本同致病組，累計(jì)有14/18(77.8﹪)的發(fā)病率，未發(fā)病小鼠中死亡2只，可能與注射不當(dāng)有關(guān)，另兩只未發(fā)病。佐劑對(duì)照組體重呈增加趨勢(shì)，Benson標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分為0分。 2，RT-PCR分別計(jì)算

5、各組小鼠腦和脾Foxp3的光密度值/β-act in的光密度值比值。 致病組、干預(yù)組和假干預(yù)組發(fā)病初期Foxp3mRNA的表達(dá)均較佐劑組降低，緩解期其表達(dá)均較佐劑組增高，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 致病組小鼠腦和脾Foxp3在發(fā)病初期表達(dá)下降，高峰期下降明顯，相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，(P<0.05)，到慢性期上升，與高峰期相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。 假干預(yù)組Foxp3各時(shí)期表達(dá)與致病組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0

6、.05)，表達(dá)變化同致病組。 干預(yù)組小鼠腦和脾Foxp3在發(fā)病初期表達(dá)下降，高峰期下降明顯，相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，(P<0.05)，到慢性期上升，與高峰期相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。 干預(yù)組小鼠腦和脾Foxp3表達(dá)在發(fā)病初期就已下降，但與致病組和假干預(yù)組沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。在發(fā)病高峰期下降較致病組和假干預(yù)組明顯，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，在慢性期較致病組表達(dá)上升，并有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)。致病組、干預(yù)組和干預(yù)對(duì)