人子宮內(nèi)膜干-祖細(xì)胞的分離、培養(yǎng)與人子宮內(nèi)膜細(xì)胞異種移植效果觀察.pdf

1、背景：子宮內(nèi)膜的修復(fù)、再生與子宮內(nèi)膜干細(xì)胞（hESC）有關(guān)，以維持其月經(jīng)和孕育受精卵的功能。臨床上有些疾病也可能與子宮內(nèi)膜干細(xì)胞有關(guān)，如子宮內(nèi)膜異位癥(EMS)。有學(xué)者提出了 EMS的干細(xì)胞起源學(xué)說，認(rèn)為經(jīng)血倒流將子宮內(nèi)膜干細(xì)胞輸送到子宮腔以外的地方，這些種子在適宜的微環(huán)境下發(fā)生粘附、增殖、浸潤生長形成病灶。雖然有學(xué)者采用裸鼠進(jìn)行人EMS模型的建立，但由于其免疫功能缺陷,而缺乏代表性。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)將初步分離人子宮內(nèi)膜細(xì)胞（h

2、EC），并利用人子宮內(nèi)膜細(xì)胞移植于ICR小鼠的一側(cè)子宮漿膜受損區(qū)，觀察異種移植是否有病灶形成。
　　方法:差速貼壁法和二次篩網(wǎng)法分離子宮內(nèi)膜上皮和基質(zhì)細(xì)胞，并分別進(jìn)行低密度和挑克隆傳代培養(yǎng)，并用流式細(xì)胞儀、免疫組化進(jìn)行鑒定。將分離的hEC移植在ICR小鼠一側(cè)子宮的漿膜損傷區(qū)，對側(cè)子宮作為對照，實(shí)驗(yàn)分三組：第一組移植混合傳代培養(yǎng)的hEC；第二組移植新鮮消化分離的hEC；第三組移植機(jī)械分離至0.5-1mm3大小的新鮮子宮內(nèi)膜微組織。各

3、組分別在2W、3W、4W處死小鼠。HE染色、免疫組化抗人ERα和CK鑒定，觀察hESC在子宮漿膜受損區(qū)的定植和局部反應(yīng)情況。
　　結(jié)果：①差速貼壁和二次篩網(wǎng)過濾法均可初步分離上皮和基質(zhì)細(xì)胞，上皮細(xì)胞呈橢圓形貼壁生長，細(xì)胞排列成鋪路石樣外觀?；|(zhì)細(xì)胞呈長梭形貼壁生長，細(xì)胞排列成漩渦狀、放射狀。細(xì)胞分別低密度培養(yǎng)后均有大小兩種克隆形成，且都有幾種不同細(xì)胞形態(tài)的克隆。上皮細(xì)胞大克隆挑克隆傳代培養(yǎng)至P6開始出現(xiàn)老化現(xiàn)象，而基質(zhì)細(xì)胞則傳至

4、P9開始出現(xiàn)生長停滯現(xiàn)象。免疫染色發(fā)現(xiàn)P5lower細(xì)胞CK-18陽性表達(dá)，ABCG2、CD90和波形蛋白表達(dá)陰性。細(xì)胞經(jīng)混合傳代培養(yǎng)后流式細(xì)胞儀檢測發(fā)現(xiàn)SP細(xì)胞的比例逐漸減少至幾乎沒有。②混合傳代培養(yǎng)的 hEC移植后，2w、3 w、4w處死小鼠均未見病灶形成，免疫組化分析未見抗人ERα和CK表達(dá)。移植新鮮消化分離的hEC與上組同期處死小鼠可見子宮表面有結(jié)節(jié)形成，體式鏡下觀察結(jié)節(jié)呈水泡狀，HE染色可見血管及間質(zhì)組織，未見腺體樣結(jié)構(gòu)，免疫