巨噬細(xì)胞在混合嵌合體誘導(dǎo)異種免疫耐受中作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：在豚鼠到大鼠實(shí)驗(yàn)動物模型中，利用脂質(zhì)體包裹c(diǎn)lodronate清除受體巨噬細(xì)胞后，采用非清髓性的預(yù)處理方案誘導(dǎo)建立混合嵌合體，研究巨噬細(xì)胞在建立非協(xié)調(diào)性異種混合嵌合體中的作用。并在此基礎(chǔ)上，行豚鼠到大鼠的腹部v，研究混合嵌合體的形成對受體的免疫功能影響，探討異種免疫耐受的機(jī)制。 方法：將SD大鼠(受體)30只隨機(jī)分成3組：所有大鼠受體接受<'60>Co γ射線全身照射，經(jīng)環(huán)磷酰胺預(yù)處理，照射后4h內(nèi)經(jīng)尾靜脈輸注BMC 2×

2、10<'8>/ml×0.8ml。A組僅輸注豚鼠BMC；B組輸注豚鼠BMC前輸注不包含clodronate空脂質(zhì)體；C組輸注豚鼠BMC前輸注包裹c(diǎn)lodronate空脂質(zhì)體。BMC移植后24小時用免疫組化法檢查受體大鼠肝臟、脾臟中巨噬細(xì)胞清除情況；用流式細(xì)胞儀法測定BMC移植后24小時內(nèi)不同時間點(diǎn)受體外周血中豚鼠細(xì)胞比例、24小時時受體脾、骨髓中豚鼠細(xì)胞比例，以及移植后21天、35天嵌合率；于BMC移植后21天，行MLR測定，并用流式細(xì)胞

3、儀法測定T淋巴亞群的變化。 在成功建立混合嵌合體的基礎(chǔ)上，行豚鼠到大鼠的心臟移植。實(shí)驗(yàn)隨機(jī)分為六組：Ⅰ組(空白組，n=5)、Ⅱ組(CVF組，n=5)Ⅲ組(CVF+clodronate脂質(zhì)體組，n=5)、Ⅳ組(CVF+豚鼠BMC移植組，n=5)、V組(CVF+豚鼠BMC移植+空脂質(zhì)體組，n=5)、Ⅵ組(CVF+豚鼠BMC移植+包裹c(diǎn)lodrorlate脂質(zhì)體組，n=5)。流式細(xì)胞儀法檢測移植前后大鼠抗豚鼠：IgG水平；記錄移植物平

4、均存活時間、檢測移植物病理組織學(xué)。 結(jié)果：輸注包裹c(diǎn)lodronate脂質(zhì)體后24小時受體大鼠肝脾(紅髓及邊緣帶)中巨噬細(xì)胞消失，21天后與正常對照相比無差異。BMC移植后24小時內(nèi)各時間點(diǎn)，C組大鼠外周血中豚鼠細(xì)胞比例均高于A、B組； 24小時時大鼠脾、骨髓中豚鼠細(xì)胞比例，C組亦明顯高于A、B兩組；比較21天及35天嵌合水平，C組明顯高于A、B兩組。21天時CD3<'+>、CD4<'+>和CD8<'+>T細(xì)胞比例均下降，各組C

5、D4/CD8比值與對照組相比無差異。MLR顯示耐受大鼠的免疫應(yīng)答反應(yīng)性降低，C組較其他組比最低。心臟移植后，Ⅰ組移植心表現(xiàn)為超急性排斥反應(yīng)，Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ各組移植心存活時間分別為：306±45分鐘、314±51分鐘、366±35分鐘、372±25分鐘、424±32分鐘，病理均表現(xiàn)為急性血管排斥反應(yīng)改變。移植后抗豚鼠IgG水平均有輕微升高，Ⅵ組上升幅度最小。 結(jié)論：1、利用脂質(zhì)體包裹c(diǎn)lodronate的方法可建立清除巨噬細(xì)胞