前列腺癌相關抗原基因的擴增及真核表達.pdf

1、前列腺癌是危害男性健康常見的惡性腫瘤，在美國前列腺癌的發(fā)病率已經超過肺癌，成為危害男性健康第一位的腫瘤.中國的前列腺癌發(fā)病率遠遠低于歐美國家，但近年來也呈現上升趨勢。本研究通過特異性擴增前列腺癌相關抗原基因，進行真核表達，為建立前列腺癌疫苗研究所需要的轉基因細胞模型及動物模型奠定了基礎。
　　 目的：從人前列腺癌細胞系中特異性擴增前列腺癌相關抗原基因，包括前列腺干細胞抗原(PSCA)、前列腺酸性磷酸酶(PAP)、前列腺特異性膜抗

2、原(PSMA)，構建真核表達載體，進行真核表達。
　　 方法：通過RT-PCR的方法從人前列腺癌細胞系LNCaP中特異性擴增PSCA、PAP、PSMA基因，連接到真核表達載體pIRES-neo中，構建真核表達質粒pIRES-neo-PSCA-His，pIRES-neo-PAP-His，pIRES-neo-PSMA-His.脂質體法瞬時轉染COS-7細胞，應用流式細胞術檢測前列腺相關抗原的蛋白表達。隨后選擇質粒pIRES-neo-

3、PSCA-His，脂質體法轉染小鼠黑色素瘤B16細胞，通過G418初步加壓篩選，用RT-PCR及免疫熒光和流式細胞術分別檢測B16細胞中人PSCA基因的mRNA轉錄和蛋白表達。
　　 結果：特異性擴增得到大小與人PSCA、PAP、PSMA基因相符的基因片段，序列測定證實與GenBank上登錄的序列一致；成功構建真核表達質粒并轉染COS-7細胞，證實質粒可以真核表達。pIRES-neo-PSCA-His質粒成功轉染B16細胞并進行