大型紅藻的藻紅蛋白分離純化及低凝固溫度瓊脂糖制備研究.pdf

1、藻紅蛋白是一種由多個(gè)亞基聚合并結(jié)合有色素的大分子量蛋白色素復(fù)合物，是紅藻中重要的捕光色素分子。藻紅蛋白因其特有的性質(zhì)，在食品、化妝品、生物醫(yī)藥等行業(yè)具有廣泛的用途。目前，由龍須菜制備藻紅蛋白的工藝過(guò)程是藻體破碎粗提、鹽析、多步色譜層析，這種純化過(guò)程往往存在藻體破碎不充分、回收率低等問(wèn)題。文中比較了超細(xì)破碎，液氮研磨，直接研磨對(duì)龍須菜破碎的效果，結(jié)果表明超細(xì)破碎法效果最好，藻紅蛋白純度和溶出率分別為0.35和0.44 mg/g。通過(guò)對(duì)一步

2、鹽析和兩步鹽析的優(yōu)化，結(jié)果表明最佳的方法為兩步鹽析法，鹽析條件為第一步20％的硫酸銨飽和鹽析，然后飽和度追加到45%，此時(shí)藻紅蛋白純度為0.73，回收率為66.39%，此純度達(dá)到食品級(jí)要求的值（>0.7）。文中對(duì)DEAE-52，Q Sepharose Fast Flow，Source15Q三種陰離子交換劑的分離純化效果進(jìn)行比較，結(jié)果表明Source15Q的分離純化效果最好，當(dāng)純度>4.0時(shí)，回收率為66.09%。紫外可見光光譜特征表明龍

3、須菜和縊基蜈蚣藻藻紅蛋白均屬于R-藻紅蛋白，龍須菜藻紅蛋白的熒光發(fā)射峰在578nm，縊基蜈蚣藻在587nm。龍須菜藻紅蛋白的α、β和γ亞基的相對(duì)分子質(zhì)量分別為18kDa、20kDa和32kDa，縊基蜈蚣藻藻紅蛋白的α、β和γ亞基的相對(duì)分子質(zhì)量分別為17kDa、20kDa和33kDa。
　　隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，瓊脂糖尤其是低電內(nèi)滲瓊脂糖受到了廣泛的使用。目前瓊脂糖已廣泛應(yīng)用于凝膠電泳，色譜層析，免疫學(xué)研究等方面。在瓊脂搪的應(yīng)用中

4、，現(xiàn)代生物技術(shù)和熱敏藥物包埋等需要較低凝固溫度的瓊脂糖。本文以真江蘺，龍須菜，硬枝江蘺為研究材料，首先研究了瓊脂糖的制備，工藝流程是堿處理，高溫煮膠和硅藻土及活性炭過(guò)濾，最后干燥，并通過(guò)紅外光譜和13C-NMR光譜研究了其化學(xué)結(jié)構(gòu)。結(jié)果表明由真江蘺制備的瓊脂糖質(zhì)量最好，測(cè)得其電內(nèi)滲(EEO)為0.116，硫酸根含量0.128%，凝膠強(qiáng)度1024g.cm-2，主要質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與Sigma公司的低電內(nèi)滲瓊脂糖(A9539)接近。
　　本文

5、利用響應(yīng)面優(yōu)化法對(duì)甲基化反應(yīng)制備低凝固溫度瓊脂糖的過(guò)程進(jìn)行優(yōu)化，并通過(guò)紅外光譜和13C-NMR光譜對(duì)低凝固溫度瓊脂糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究。制備的低凝固溫度瓊脂糖凝固溫度(l.5%，w/v)為26.7℃，融化溫度(l.5%，w/v)為66.7，凝膠強(qiáng)度(l.5%， w/v)為269 g.cm-2。紅外光譜圖顯示修飾后瓊脂糖在1650cm-1左右處的峰分裂成1650cm-1和1566cm-1兩個(gè)峰，瓊脂糖甲基化修飾后的13C-NMR譜圖前后對(duì)