桑葉多酚類物質(zhì)分離提取及活性的初步研究.pdf

1、本課題優(yōu)化了桑葉多酚的提取工藝。把桑葉多酚粗分為乙醇層(MP)、石油醚層(MPP)、乙酸乙酯層(MPE)、正丁醇層(MPB)和水層(MPW)。建立了一個反相高效液相(RP-HPLC)法測定桑葉多酚類物質(zhì)含量的方法，并結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用(LC-MS)法，初步測定了桑葉中主要多酚類物質(zhì)的分子質(zhì)量和可能的分子式。探討了桑葉提取物的抗氧化活性和抑菌活性，并對抑菌機理進行了初步探索。
　　 通過單因素實驗和響應(yīng)面分析法，得到桑葉多酚的最佳提取工

2、藝參數(shù)為提取時間2h，提取溫度60℃，乙醇濃度46％，固液比1:25，在此條件下進行3次平行實驗，桑葉多酚平均提取率為2.44％。
　　 建立了一個反相高效液相(RP-HPLC)法測定桑葉不同提取層多酚含量的方法。結(jié)果表明MP中綠原酸含量最高，其次是蘆丁、槲皮苷、槲皮素、沒食子酸、桑色素。MPP中檢測到有槲皮素，未檢測到?jīng)]食子酸、綠原酸、蘆丁、槲皮苷、桑色素的存在。MPE中綠原酸含量最高，其次是蘆丁、槲皮苷、沒食子酸、槲皮素、桑

3、色素。MPB中蘆丁含量最高，其次是槲皮素、槲皮苷、沒食子酸、桑色素，無綠原酸檢測出。MPW中槲皮苷含量最高，其次是綠原酸、沒食子酸、蘆丁，無桑色素、槲皮素檢測出。通過多酚含量的多少與種類比較，說明桑葉多酚類成分多集中于中等極性的乙酸乙酯層(MPE)和乙醇層(MP)。通過ESI-MS離子流圖，根據(jù)離子峰的分子質(zhì)量，猜測可能的分子式，對照多酚標準品和參考文獻，得到桑葉乙酸乙酯層(MPE)中可能含有綠原酸、咖啡奎寧酸、蘆丁、柚苷等多酚類物質(zhì)。

4、
　　 采用體外抗氧化實驗法，結(jié)果表明MPP、MPE、MP這三相的還原能力相當，比MPB高的多。MPE清除DPPH自由基的能力明顯高于其他層，其中MPE的IC50為3.47mg/mL，而MPB幾乎沒有DPPH自由基清除能力。MP、MPE、MPP的ABTS自由基清除能力比MPB高的多，其中MP、MPE、MPP的IC50分別為1.14mg/mL、1.34mg/mL、1.34mg/mL。MPP、MP清除超氧自由基的能力遠遠高于其它層。

5、MP的清除羥基自由基的能力遠高于其他層，其中MP的IC50為10.09mg/mL。綜上所述，桑葉乙酸乙酯層(MPE)、乙醇層(MP)的抗氧化能力較強。這可能與這兩層中多酚類物質(zhì)的含量與種類有關(guān)。
　　 采用牛津杯法和二倍稀釋法研究桑葉提取物的抑菌效果，結(jié)果表明MPP和MPW對實驗菌株無抑菌圈產(chǎn)生，MPE對藤黃微球菌（Micro coccus luteus）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、綠膿假單胞

6、菌（Pseudomonas aeruginosa）、粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）有抑菌圈產(chǎn)生，最小抑菌濃度（MIC值）分別為25.0mg/mL、12.5mg/mL、100.0mg/mL、25.0mg/mL;MP對藤黃微球菌（Micrococcus luteus）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大腸桿菌(E. coli)、粘質(zhì)沙雷氏菌（Serratia marcescens）都有抑