重組水蛭素對(duì)大鼠撕脫皮瓣存活影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：本實(shí)驗(yàn)通過(guò)建立大鼠背部撕脫皮瓣模型,研究重組水蛭素對(duì)撕脫皮瓣的保護(hù)作用及其機(jī)制，并探討重組水蛭素在臨床治療撕脫皮瓣的應(yīng)用前景。方法：選用健康SD大鼠108只,雌雄不拘,體重(250±50g),隨機(jī)分為3組:2個(gè)治療組(A組:重組水蛭素治療組, B組:低分子肝素治療組)和1個(gè)空白對(duì)照組(C組:注射用生理鹽水組),每組36只,按40 mg/kg體重、1％戊巴比妥鈉腹腔注射麻醉,以背部中線為準(zhǔn),蒂位于頭側(cè),設(shè)計(jì)4cm×6cm大小的長(zhǎng)方形

2、隨意皮瓣,蒂部行保護(hù)性固定后,遠(yuǎn)端用縫線固定于細(xì)鐵棒后與精密稱量的重物相連,施予均為8kg的牽拉力,時(shí)間均為10秒形成撕脫皮瓣模型,遠(yuǎn)端游離緣稍加修剪后原位縫合。分別于術(shù)后即刻、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)于皮瓣蒂部、距蒂部2cm和4cm三等分點(diǎn)皮下均勻注射重組水蛭素(2mg/1ml/皮瓣)、低分子肝素(2mg/1ml/皮瓣),空白對(duì)照組同法給予注射等量生理鹽水(1ml/皮瓣)。術(shù)后觀察皮瓣表面毛發(fā)生長(zhǎng)情況,淤血、腫脹情況,皮瓣存活面積

3、;分別檢測(cè)術(shù)后12h、1d、3d皮瓣遠(yuǎn)端組織內(nèi)P-選擇素含量,3d、5d、7d皮瓣遠(yuǎn)端組織內(nèi)VEGF含量;高倍鏡下觀察術(shù)后12h、1d、3d、5d、7d皮瓣遠(yuǎn)端組織病理切片內(nèi)毛細(xì)血管內(nèi)炎性細(xì)胞聚集情況及微血栓形成情況。結(jié)果：1.大體觀察:術(shù)后12、24小時(shí)3組皮瓣均出現(xiàn)不同程度的發(fā)紺、腫脹,空白對(duì)照組較兩治療組發(fā)紺、腫脹嚴(yán)重;空白對(duì)照組淤滯帶界限較清晰,治療組淤滯帶界限不清。術(shù)后第5、7天,治療組皮瓣遠(yuǎn)端發(fā)紺、腫脹逐步消退,存活良好?？?/p>

4、白對(duì)照組皮瓣遠(yuǎn)端和周緣仍較腫脹,且呈暗黑色,質(zhì)地變硬,表面毛發(fā)有脫失,未見(jiàn)毛細(xì)血管反應(yīng),趨向于壞死。術(shù)后第14天重組水蛭素組和低分子肝素組存活面積百分比分別為(86.07±1.30)％和(81.46±1.06)％,均比空白對(duì)照組(77.03±1.25)％高,有顯著性差異(p<0.01),重組水蛭素組比低分子肝素組皮瓣成活率高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05)。2.組織學(xué)觀察：術(shù)后12h:空白對(duì)照組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)大片出血區(qū),充血、水腫明顯,

5、有大量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);肝素組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)片狀出血、充血,水腫較明顯,有較多中性粒細(xì)胞浸潤(rùn);重組水蛭素組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)點(diǎn)狀出血,可見(jiàn)充血,水腫,少量中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。1d:空白對(duì)照組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)大片出血區(qū),充血、水腫明顯,中性粒細(xì)胞呈團(tuán)塊狀聚集,并可見(jiàn)早期壞死;肝素組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)充血、水腫,中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)等均較明顯;重組水蛭素組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)充血、水腫,可見(jiàn)數(shù)量不等的中性粒細(xì)胞散在存在。3d:空白對(duì)照組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)大片出血,淤血明顯,大量形成炎

6、性肉芽組織,其中可見(jiàn)中性粒細(xì)胞散在存在;肝素組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)淤血、水腫,有炎性肉芽組織形成,可見(jiàn)中性粒細(xì)胞散在分布;重組水蛭素組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)散在淤血,出血少見(jiàn),炎性肉芽組織形成,散在的少量中性粒細(xì)胞。5d:空白對(duì)照組鏡下可見(jiàn)少量片狀出血、淤血,可見(jiàn)微血栓形成,炎性肉芽組織水腫;肝素組鏡下見(jiàn)少量淤血、水腫,炎性肉芽組織較成熟;重組水蛭素組鏡下見(jiàn)少量淤血,炎性肉芽組織成熟。7d:空白對(duì)照組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)微血栓形成,毛細(xì)血管閉塞,新生毛細(xì)血管少;

7、肝素組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)少量微血栓形成,有新生毛細(xì)血管;重組水蛭素組鏡下見(jiàn)組織內(nèi)新生血管增生活躍,肉芽組織成熟。3.P-選擇素含量檢測(cè)(pg/ml)：術(shù)后第12小時(shí)、1天、3天,重組水蛭素組與低分子肝素組P-選擇素含量分別為(129.740±12.302)與(151.584±12.409)、(111.030±6.824)與(134.434±8.707)、(101.674±4.429)與(118.308±7.535),其對(duì)應(yīng)空白組為(196.0

8、34±18.442)、(162.087±14.485)、(132.473±8.142),第12小時(shí)、1天、3天重組水蛭素組與低分子肝素組和空白對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。4.VEGF含量檢測(cè):術(shù)后第3、5、7天,重組水蛭素組與低分子肝素組 VEGF含量分別為(212.507±15.096)與(158.733±15.311)、(214.010±13.811)與(167.134±11.455)、(218.093±13.464

9、)與(177.484±8.183),其對(duì)應(yīng)空白組為(120.454±7.575)、(130.133±19.159)、(133.800±4.882),第3、5、7天重組水蛭素組與低分子肝素組和空白對(duì)照組之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論：局部注射重組水蛭素能有效抑制P-選擇素的生成,減少炎性細(xì)胞的聚集,阻斷微血栓的形成,改善撕脫皮瓣局部缺血、缺氧狀態(tài);減弱內(nèi)皮細(xì)胞的損傷,促進(jìn)VEGF的表達(dá),刺激新生毛細(xì)血管增生,提高撕脫皮瓣的存活