低頻低能量超聲聯(lián)合微泡對(duì)人前列腺癌細(xì)胞PC-3生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:對(duì)超聲功率、輻照時(shí)間、微泡/細(xì)胞懸液體積比參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化，確定超聲聯(lián)合微泡誘導(dǎo)人前列腺癌細(xì)胞PC-3的凋亡的最優(yōu)參數(shù)組合并且探討超聲聯(lián)合微泡對(duì)人雄激素非依賴型前列腺癌細(xì)胞PC-3凋亡及侵襲轉(zhuǎn)移的影響、探討其機(jī)制。
　　方法:(1)選定超聲功率、輻照時(shí)間、微泡/細(xì)胞懸液體積比三因素，超聲功率（實(shí)驗(yàn)中分組采用電功率15mW/cm2、20mW/cm2、25mW/cm2、30mW/cm2等分分組，論文中采用實(shí)測(cè)功率描述）:46mW/c

2、m2，78mW/cm2，138mW/cm2，199mW/cm2。輻照時(shí)間:30s，60s，90s，120s。微泡/細(xì)胞懸液體積比:10％，20％，30％，40％。每因素4個(gè)水平設(shè)定正交設(shè)計(jì)表，按正交設(shè)計(jì)表所列實(shí)驗(yàn)進(jìn)行超聲輻照，輻照后細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)24小時(shí)，用流式細(xì)胞儀進(jìn)行細(xì)胞凋亡檢測(cè)，確定最優(yōu)參數(shù)。
　　(2)利用第一步優(yōu)化的參數(shù)，以頻率21kHz、聲強(qiáng)為46mW/cm2超聲，采用連續(xù)波，輻照人前列腺癌PC-3細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)分3組:

3、對(duì)照組、單純超聲組和超聲聯(lián)合微泡組（加聲諾維200μl）。輻照后，CCK-8、細(xì)胞集落實(shí)驗(yàn)檢測(cè)對(duì)細(xì)胞增殖的影響;輻照后培養(yǎng)24h，透射電鏡及TUNEL染色、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡，實(shí)時(shí)定量PCR及Western-blot檢測(cè)對(duì)Bcl-2、Bax表達(dá)的影響。
　　(3)利用第一步優(yōu)化的參數(shù)，以頻率21kHz、聲強(qiáng)為46mW/cm2超聲，采用連續(xù)波，輻照人前列腺癌PC-3細(xì)胞懸液。實(shí)驗(yàn)分3組:對(duì)照組、單純超聲組和超聲聯(lián)合微泡組（加聲諾

4、維200μl）。輻照后，CCK-8繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線;輻照后培養(yǎng)12h，Transwell小室模型進(jìn)行細(xì)胞體外侵襲及轉(zhuǎn)移實(shí)驗(yàn)，實(shí)時(shí)定量PCR及Western-blot檢測(cè)對(duì)MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響。
　　結(jié)果:(1)對(duì)細(xì)胞凋亡的影響因素，超聲功率＞微泡/細(xì)胞懸液體積＞輻照時(shí)間;各因素水平影響:超聲功率:46mW/cm2＞138mW/cm2＞78mW/cm2＞199mW/cm2;輻照時(shí)間:30s＞60s＞120s＞90s;微泡

5、/細(xì)胞懸液體積:20％＞10％＞30％＞40％。
　　(2)超聲聯(lián)合微泡組細(xì)胞集落數(shù)量明顯少于對(duì)照組，OD值明顯減小(P＜0.05)，超聲聯(lián)合微泡能明顯抑制人前列腺癌細(xì)胞的增殖;超聲聯(lián)合微泡組較對(duì)照組能明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(P＜0.05);超聲聯(lián)合微泡能夠下調(diào)Bcl-2的表達(dá)，上調(diào)Bax的表達(dá)（P＜0.05）。
　　(3)輻照后各組細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)12h時(shí)各組細(xì)胞生長(zhǎng)區(qū)別不明顯（均P＞0.05）;輻照后12h，超聲聯(lián)合微泡組侵襲細(xì)胞

6、數(shù)量明顯少于對(duì)照組(P＜0.05);超聲聯(lián)合微泡組轉(zhuǎn)移細(xì)胞數(shù)量明顯少于對(duì)照組（P＜0.05）;超聲聯(lián)合微泡能夠下調(diào)MMP-2、MMP-9的表達(dá)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:(1)低頻低功率超聲聯(lián)合微泡誘導(dǎo)人雄激素非依賴型前列腺癌細(xì)胞PC-3凋亡最佳組合為超聲功率46mW/cm2，輻照時(shí)間30s，微泡/細(xì)胞懸液體積比20％。
　　(2)低頻低能量超聲聯(lián)合微泡能夠抑制人雄激素非依賴型前列腺癌細(xì)胞PC-3增殖，并誘導(dǎo)人雄激素非依賴