脾切除對(duì)肝臟缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究.pdf

1、目的：探討脾切除對(duì)肝臟缺血再灌注損傷的影響，以及可能的機(jī)制。
　　 方法：雄性Wistar大鼠60只，隨機(jī)分成假手術(shù)組、缺血再灌注組、缺血再灌注+脾切除組，每組20只。采用無(wú)損傷血管夾夾閉供應(yīng)肝左葉、中葉的肝動(dòng)脈和門(mén)靜脈，缺血1小時(shí)后開(kāi)放血流，分別于再灌注3h、24h、48h、72h后處死大鼠，取肝臟及血液標(biāo)本。檢測(cè)各組及各時(shí)間點(diǎn)大鼠血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、總膽紅素(TBIL)水平，肝臟組織用HE染色判

2、斷肝臟損傷程度、中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)情況。用實(shí)時(shí)PCR(RT-PCR)檢測(cè)肝組織中基質(zhì)金屬蛋白酶9(MMP-9)mRNA的表達(dá)情況。
　　 結(jié)果：再灌注3h后，缺血再灌注組和缺血再灌注+脾切除組的肝組織已經(jīng)出現(xiàn)缺血再灌注損傷。再灌注24h后，缺血再灌注組和缺血再灌注+脾切除組中的ALT、AST、TBIL水平均達(dá)到最高水平，雖然缺血再灌注+脾切除組中ALT、AST、TBIL水平略高于缺血再灌注組，但是兩組間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。而再灌注

3、48h和72h后，缺血再灌注+脾切除組中ALT、AST、TBIL水平顯著低于缺血再灌注組(P<0.05)。肝細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果：各時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組(SH組)凋亡指數(shù)值均在正常范圍內(nèi)。3h、24h兩時(shí)間點(diǎn)中IR組中凋亡指數(shù)略低于IR+ST組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性；而48h、72h兩時(shí)間點(diǎn)中IR+ST組凋亡指數(shù)均顯著低于IR組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。高倍鏡下中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果可見(jiàn)：3h、24h兩時(shí)間點(diǎn)中IR組中中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)略低于IR+

4、ST組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性；而48h、72h兩時(shí)間點(diǎn)中IR+ST組中性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)均顯著低于IR組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性(P<0.05)。HE染色的結(jié)果：可見(jiàn)各時(shí)間點(diǎn)假手術(shù)組(SH組)肝小葉排列整齊，無(wú)明顯組織損傷及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)。缺血再灌注組(IR組)：可見(jiàn)局部有組織缺血壞死及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，3h時(shí)間點(diǎn)壞死面積為30±2.6％，24h時(shí)間點(diǎn)壞死面積大約占80±5.2％，48h時(shí)間點(diǎn)壞死面積為60±4.1％，72h時(shí)間點(diǎn)壞死面積為50±3.4％。

5、缺血再灌注+脾切除組(IR+ST組)：在再灌注后3小時(shí)和24小時(shí)可見(jiàn)局部有組織缺血壞死及中性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，與IR組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。再灌注48h后壞死面積大約占40±3.0％，再灌注72h后壞死面積為35±2.7％，組織壞死面積顯著少于IR組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異性(P<0.05)。用RT-PCR檢測(cè)各組大鼠肝組織中MMP-9mRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示在再灌注48h后，IR+ST組較IR組MMP-9mRNA表達(dá)明顯減弱，約為IR組的60.