糞樣孕酮酶免疫檢測方法的建立及在母豬早期妊娠診斷的應(yīng)用.pdf

1、孕酮主要是由卵巢黃體細(xì)胞、卵泡內(nèi)膜細(xì)胞和妊娠時的胎盤產(chǎn)生的，屬于甾體類激素，存在于動物的血液、糞便、尿液、乳汁和唾液中。通過測定這些樣品中孕酮濃度可以進(jìn)行早期妊娠診斷和卵巢機(jī)能的狀態(tài)的監(jiān)測。
　　本實驗根據(jù)酶免疫的基本原理建立了母豬糞樣孕酮ELISA檢測方法，在此基礎(chǔ)上優(yōu)化了該檢測方法的反應(yīng)條件:酶標(biāo)板的孔間變異系數(shù)為3.81％;最佳抗體包被濃度的稀釋度為1∶20000;酶標(biāo)抗原的最佳工作濃度的稀釋度為1∶20000;最佳包被時間

2、4℃過夜、37℃2h;2％BSA的封閉效果最好;建立的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=-10.71 X+62.751(r2=-0.9947);底物體系中OPD的最佳反應(yīng)濃度為0.4mg/mL;過氧化氫的最佳用量為1.6μL/mL(30％H2O2);底物顯色時間為37℃0.5h。
　　依據(jù)劑量-反應(yīng)曲線參數(shù)的統(tǒng)計方法使用A/A0-logC的數(shù)學(xué)模型，測得了ELSIA的相關(guān)參數(shù)。曲線擬合的方程為Y=-10.71 X+62.751(r2=-0.9947)

3、;方法的靈敏度為12.13ng/g;方法的批內(nèi)變異系數(shù)為4％;方法的批間變異系數(shù)為9.6％;與雌二醇、雌三醇和雌酮無交叉反應(yīng)(P＜0.01％)，與睪酮的交叉反應(yīng)為0.35％;方法的回收率在91％-109.7％之間。
　　根據(jù)母豬糞樣孕酮ELISA檢測方法，通過檢測配種后母豬糞樣孕酮濃度進(jìn)行早期妊娠診斷。當(dāng)配種后母豬糞樣孕酮的濃度超過150 ng/g糞樣時，就可確認(rèn)其妊娠;小于150 ng/g糞樣時，可確認(rèn)其空懷。本試驗檢測了配種后