等溫雙鏈核酸擴增檢測新技術(shù)研究.pdf

1、核酸擴增技術(shù)是生化分析檢測的熱門研究領(lǐng)域，迄今為止已經(jīng)發(fā)展出了眾多基于核酸擴增的檢測方法。聚合酶鏈式反應(yīng)(Polymerase chain reaction，PCR)及其衍生技術(shù)，需要經(jīng)過循環(huán)的變溫過程，對儀器依賴性強，在現(xiàn)場快速檢測等領(lǐng)域的應(yīng)用具有一定的局限性;因此，發(fā)展簡便快速、靈敏準確的等溫核酸擴增技術(shù)具有非常重要的意義。本論文中，在以往鏈置換擴增的基礎(chǔ)上，于完全等溫條件下建立了一種指數(shù)式擴增檢測雙鏈核酸的新方法，并對該類型反應(yīng)所

2、出現(xiàn)的非特異性擴增進行了研究。
　　本論文中，將切刻酶和聚合酶聯(lián)合使用，在完全等溫的條件下建立了一種擴增檢測雙鏈核酸的新方法。該方法實現(xiàn)了單鏈靶標的產(chǎn)生與擴增在封閉體系中及同一溫度下進行，不需要額外的預(yù)變性等操作步驟，方法簡便快速，靈敏準確。應(yīng)用該方法對pBluescriptⅡ KS(+)質(zhì)粒（簡稱為PBS質(zhì)粒）DNA進行了檢測，當目標DNA濃度為1.0 fmol到1.0zmol時，檢測結(jié)果具有良好的線性關(guān)系;并且方法在復(fù)雜體系進

3、行檢測時，也表現(xiàn)出了較好的穩(wěn)定性。為了檢測該方法的實際應(yīng)用能力，本論文對副溶血性弧菌進行了檢測，結(jié)果顯示，該方法可以將約100zmol的基因組DNA檢測出來，證明了本方法具有一定的實際應(yīng)用能力。
　　為了進一步提高應(yīng)用本方法檢測副溶血性弧菌的靈敏度，本論文探討了應(yīng)用分子信標代替Sybr GreenⅠ進行信號檢測的可行性;同時，為了探究該類型反應(yīng)出現(xiàn)非特異性擴增的原因，本論文對含有切刻酶識別序列的引物所引起的非特異性擴增進行了研究，