美他多辛對(duì)酒精性脂肪肝大鼠CYP2E1影響的研究.pdf

1、目的：美他多辛是在國內(nèi)上市不久，專一治療酒精性脂肪肝病藥物。臨床上使用美他多辛主要用于治療酒精性脂肪肝，對(duì)其預(yù)防作用考察的不多。通過調(diào)研文獻(xiàn)發(fā)現(xiàn)CYP2E1與酒精性脂肪肝密切相關(guān)，但國內(nèi)未有美他多辛與CYP2E1之間聯(lián)系的研究。本課題欲通過構(gòu)建酒精性脂肪肝大鼠模型，研究美他多辛對(duì)酒精性脂肪肝大鼠的預(yù)防作用，并探索其作用機(jī)制，研究美他多辛與CYP2E1的關(guān)系，分析CYP2E1是否是美他多辛的治療靶點(diǎn)。
　　 方法：清潔級(jí)Wista

2、r雄性大鼠30只，體重(200±20)g，每日給予大鼠標(biāo)準(zhǔn)食物和飲用水各2次，保持光照和避光循環(huán)飼養(yǎng)各12h。將所有大鼠隨機(jī)分為3組，分別為模型組10只，預(yù)防組10只，對(duì)照組10只。采用乙醇灌胃法建立酒精性脂肪肝大鼠模型：給予大鼠40％乙醇（劑量為乙醇8g·kg-1·d-1）灌胃，每日2次，間隔8h，至4wk末。5wk開始，將乙醇濃度增至50％(劑量為乙醇10g·kg-1·d-1)，至8wk末。對(duì)照組：不灌服乙醇，每日2次給予等體積滅菌

3、注射用水；模型組：1～8wk建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同時(shí)，在每次灌服乙醇1h后給予等體積滅菌注射用水;預(yù)防組：1～8wk建立酒精性脂肪肝大鼠模型的同時(shí)，每次灌服乙醇1h后給予美他多辛(300mg·kg-1·d-1)。給大鼠超聲檢查，采用全自動(dòng)生化儀來檢測血清指標(biāo)，ELISA測定脂蛋白脂酶，HE染色觀察肝組織病理學(xué)變化，油紅O染色觀察肝脂肪沉積，天狼星紅染色染色觀察肝膠原染色，蒽酮法測定肝糖原含量，肝組織免疫組化檢測TNF-α、IL-6

4、、CYP2E1的蛋白表達(dá)，蛋白印記法檢測肝組織中CYP2E1蛋白含量，所得數(shù)據(jù)使用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)分析軟件。
　　 結(jié)果：大鼠酒精性脂肪肝模型建立成功，模型組有1只大鼠死亡，為酒精誤吸入氣管所致，其他組無大鼠死亡。模型組和預(yù)防組大鼠體重均有低，與對(duì)照組相比有顯著性差異(P＜0.05)。肉眼觀察對(duì)照組大鼠肝臟為鮮紅色，邊緣銳利，表面光滑，切面無顆粒感;模型組大鼠肝臟體積增大，呈暗黃色，切面油膩，肝包膜欠平整或呈鋸齒狀改變；預(yù)防

5、組大鼠肝臟色澤比模型組淺，但較對(duì)照組略深。超聲影像學(xué)顯示對(duì)照組大鼠肝臟包膜光滑，回聲均質(zhì)，血管紋理清，肝臟大小正常；模型組大鼠超聲檢查示肝臟前場回聲增強(qiáng)，后場回聲衰減，亮度強(qiáng)，血管紋理不清，脂肪浸潤。預(yù)防組大鼠超聲檢查示肝臟回聲稍強(qiáng)，分布欠均勻，血管紋理較模型組顯示清晰。HE、油紅O、天狼猩紅病理學(xué)染色顯示對(duì)照組大鼠肝小葉完整，肝細(xì)胞呈多邊形，圍繞中央靜脈呈放射狀，肝竇清晰可見，肝索排列整齊，肝小葉匯管區(qū)基本結(jié)構(gòu)清晰可見，肝細(xì)胞內(nèi)無脂肪

6、沉積，膠原組織少見；模型組肝細(xì)胞腫脹、氣球樣變，肝小葉中心脂肪液滴沉積非常嚴(yán)重，還可見大量紅色條狀膠原纖維，與對(duì)照組相比(P＜0.01)；預(yù)防組：可見有少量脂肪沉積，匯管區(qū)可見少量膠原組織。與對(duì)照組和預(yù)防組相比，大鼠酒精性脂肪肝模型組ALT、AST、TG明顯升高(P＜0.01，P＜0.05)，TC表達(dá)低(P＜0.01)。肝糖原含量預(yù)防組與對(duì)照組相比明顯下降(P＜0.01)，預(yù)防組大鼠肝糖原含量也低于對(duì)照組(P＜0.05)，比模型組高，但

7、無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。酒精性脂肪肝大鼠肝臟脂蛋白脂酶含量明顯升高(P＜0.01)；模型組肝糖原含量下降，預(yù)防組大鼠肝糖原含量高于模型組(P＜0.01)。酒精性誘導(dǎo)脂肪肝后，TNF-α、IL-6水平均顯著升高，與前人研究報(bào)道一致，而給予美他多辛可有效抑制TNF-α、IL-6的水平。CYP2E1免疫組化和western blot結(jié)果顯示模型組表達(dá)與對(duì)照組相比增高(P＜0.05);預(yù)防組CYP2E1表達(dá)較模型組明顯減少，美他多辛顯著抑制了CYP2E1