c-Met在膽管癌惡性進(jìn)展中的作用及其抑制劑對(duì)膽管癌治療作用的研究.pdf

1、研究背景和目的：
　　 膽管癌是起源于膽管上皮細(xì)胞的惡性腫瘤，主要分為肝內(nèi)膽管癌和肝外膽管癌。膽管癌惡性程度高、預(yù)后差，根治性手術(shù)切除后患者的5年生存率也僅為20％～40％。膽管癌細(xì)胞強(qiáng)大的局部侵犯和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力是膽管癌預(yù)后極差的兩大主要危險(xiǎn)因素。目前，在膽管癌的治療中也缺乏有效的特異性的化療藥物，因而開發(fā)靶向特定分子的化療藥物顯得尤為重要。
　　 酪氨酸蛋白激酶c-Met是肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子（hepatocyte grow

2、th factor，HGF）的受體。目前研究表明其激活可影響細(xì)胞的增殖、遷移、凋亡、形態(tài)發(fā)生和血管的生成。文獻(xiàn)報(bào)道多種癌細(xì)胞中存在c-Met的突變以及過度激活，因此靶向c-Met的生物治療可以運(yùn)用到多種惡性腫瘤的治療中。目前針對(duì)c-Met的抑制劑不斷出現(xiàn)，由注射用的su11274和PHA-665752發(fā)展到口服用的PF-2341066。PF-2341066是ATP競(jìng)爭(zhēng)性的口服小分子化合物，它具有良好的生物可用性及極高的水溶性，目前已經(jīng)進(jìn)

3、入到三期臨床，是目前針對(duì)c-Met靶向治療的潛力藥物。
　　 該部份實(shí)驗(yàn)對(duì)c-Met在膽管癌細(xì)胞中的作用及其選擇性小分子抑制劑PF-2341066對(duì)膽管癌的治療作用進(jìn)行了探討。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)c-Met在三種膽管癌細(xì)胞系中磷酸化水平均明顯升高。以靶向Met的siRNA下調(diào)c-Met表達(dá)后，膽管癌細(xì)胞系的增殖、遷移和侵襲能力均受到抑制。組織水平的檢測(cè)結(jié)果顯示，膽管癌組織中c-Met及p-Met的水平也明顯增高。值得注意的是，膽管癌樣本芯片

4、的結(jié)果顯示，p-Met的表達(dá)水平與患者的預(yù)后呈負(fù)相關(guān)。我們進(jìn)一步驗(yàn)證了c-Met小分子抑制劑對(duì)膽管癌細(xì)胞的作用，結(jié)果顯示c-Met小分子抑制劑PF-2341066能夠抑制膽管癌細(xì)胞的增殖、遷徙、侵襲和細(xì)胞周期的進(jìn)程，同時(shí)誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果也表明，PF-2341066抑制膽管癌細(xì)胞體內(nèi)移植瘤的生長(zhǎng)。
　　 本部份研究闡述了p-Met的表達(dá)水平與膽管癌患者預(yù)后的關(guān)系，可作為膽管癌預(yù)后判斷的指標(biāo)。新興的c-Met ATP競(jìng)爭(zhēng)

5、性的口服小分子化合物PF-2341066對(duì)膽管癌細(xì)胞的生長(zhǎng)具有抑制作用，是膽管癌分子靶向治療的潛力藥物。
　　 實(shí)驗(yàn)方法：
　　 1.通過Western blot技術(shù)檢測(cè)膽管癌細(xì)胞和組織中c-Met及p-Met的表達(dá)水平;
　　 2.通過siRNA介導(dǎo)的基因沉默技術(shù)檢測(cè)c-Met對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響;
　　 3.通過膽管癌組織芯片數(shù)據(jù)分析p-Met的表達(dá)水平與患者預(yù)后指標(biāo)的相關(guān)性。
　　

6、4.用c-Met選擇性抑制劑處理膽管癌細(xì)胞，檢測(cè)c-Met對(duì)膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.膽管癌細(xì)胞中c-Met呈高水平磷酸化;
　　 2.c-Met對(duì)膽管癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲起促進(jìn)作用;
　　 3.膽管癌組織中c-Met呈高水平磷酸化;
　　 4.膽管癌組織樣本芯片數(shù)據(jù)分析結(jié)果顯示p-Met的表達(dá)水平標(biāo)志著膽管癌的預(yù)后;
　　 5.在膽管癌細(xì)胞系中c-Met抑

7、制劑對(duì)c-Met磷酸化以及下游信號(hào)通路有抑制作用;
　　 6.c-Met的抑制劑PF2341066能夠抑制膽管癌細(xì)胞的增殖，誘導(dǎo)膽管癌細(xì)胞周期的終止和凋亡的發(fā)生，抑制其遷移和侵襲，抑制裸鼠皮下荷瘤的移植瘤的生長(zhǎng)。
　　 結(jié)論：
　　 本研究發(fā)現(xiàn)在膽管癌細(xì)胞和組織中c-Met呈高水平磷酸化，c-Met對(duì)膽管癌細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲起促進(jìn)作用，p-Met的表達(dá)水平標(biāo)志著膽管癌的預(yù)后，可作為膽管癌治療的新靶點(diǎn)。最新研制