丙戊酸鈉對急性髓系白血病細胞株HL-60增殖和凋亡的影響.pdf

1、[目的]
　　 研究丙戊酸鈉(VPA)對急性髓系白血病細胞株HL-60細胞的增殖抑制及誘導凋亡作用,并初步探討其可能作用機制。
　　 [方法]
　　 1.分別用不同濃度VPA處理HL-60細胞24h、36h、48h、60h、72h,采用CCK-8法檢測各作用時間點的細胞生K=抑制率。
　　 2.采用瑞氏染色光學顯微鏡觀察VPA作用后HL-60細胞形態(tài)的變化。
　　 3.用不同濃度VPA處理HL-6

2、0細胞48h,應用流式細胞儀(FCM)檢測凋亡細胞比例及細胞周期分布的變化。
　　 4.用2.Ommol/L VPA處理HL-60細胞,分別于36h、48h采用細胞凋亡-DNALadder抽提試劑盒提取DNA,瓊脂糖凝膠電泳檢測凋亡細胞DNA片段化現(xiàn)象。
　　 [結果]
　　 1.不同濃度VPA處理HL-60細胞,隨著藥物濃度的增加及作用時間的延長,細胞的生長逐步受到抑制,呈明顯劑量依賴性和時問依賴性趨勢。各濃度

3、組VPA處理HL-60細胞24h、36h、48h、60h、72h,細胞的生長抑制率百分比(％)分別為:0.5mmol/L VPA:14.45±0.43、14.3±0.48、28±3.55、30.51±1.58、38.21±4.28(不同時間點間比較P＜0.01);1.0mmol/L VPA:14.49±6.84、20.56±1.37、37.43±1.98、43.17±1.9、57.77±2.21(不同時間點間比較P＜0.01);2.0m

4、mol/L VPA:27.42±5.21、45.77±1.11、77.16±6.34、86.83±4.95、89.96±2.02(不同時間點間比較P＜0.01);4.0mmol/L VPA:48.7±0.72、89.26±1.42、92.64±5.5、98.24±0.43、97.57±0.77(不同時間點間比較P＜0:01)。同樣采用單因素方差分析,各相同時間點不同濃度組間比較P＜0.01。
　　 2.2.0mmol/L VPA

5、處理HL-60細胞48h,細胞呈現(xiàn)典型的凋亡細胞的形態(tài)特征:光鏡下可見凋亡細胞胞體固縮、核固縮、核碎裂及凋亡小體。
　　 3.1.0和2.Ommol/LVPA處理HL-60細胞48 h,用Annexin V-FITC/PI染色后FCM檢測凋亡細胞百分率,由處理前的(1.25±0.457)%分別上升為(3.27±0.984)%、(10.3±3.4)%,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(PP＜0.05);用PI染色后FCM檢測細胞周期結

6、果示:GO/G1期細胞比例逐漸增多,由處理前的(34.12±3.85)%分別上升為(49.28±5.5)%和(85.22±5.39)%;S期細胞比例逐漸減低,由處理前的(57.84±4.64)%分別減少為(45.08±7.49)%和(12.32±5.61)%:細胞增殖指數(shù)(PI),由處理前的(65.88±3.85)%分別下降至(50.7±5.5)%和(14.76±5.37)%(兩兩比較P均＜0.01)。PI染色后FCM檢測的凋亡細胞亞二

7、倍體峰由處理前的(0.28±0.3)%分別上升為(5.25±1.36)%和(16.58±1.39)%,與對照組相比差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　 4.2.0 mmol/L VPA處理HL-60細胞36h及48 h后,DNA凝膠電泳均顯示典型的凋亡DNA梯形條帶。
　　 [結論]
　　 1.0.5～4.0mmol/L劑量范圍內(nèi),VPA對HL-60細胞具有增殖抑制作用,且呈劑量、時間依賴性。