蛋白酶體抑制劑對腎間質(zhì)成纖維細胞增殖和凋亡的影響及機制研究.pdf

1、腎間質(zhì)纖維化（RIF）是大部分終末期腎?。‥SRD）的最終結局。腎間質(zhì)成纖維細胞是腎間質(zhì)纖維化主要效應細胞之一，其增殖活化是腎間質(zhì)纖維化發(fā)生和發(fā)展的主要因素。在眾多促纖維化的因子中，轉(zhuǎn)化生長因子-β1（Transforming growth factor-β1，TGF-β1）被認為是最重要的致纖維化誘導因子。素蛋白酶體通路（UPP）是真核細胞內(nèi)主要的蛋白質(zhì)降解系統(tǒng)。UPP主要作用是通過一系列酶聯(lián)反應，對細胞內(nèi)蛋白質(zhì)進行選擇性降解，從而調(diào)

2、節(jié)細胞內(nèi)特殊蛋白的濃度，發(fā)揮重要作用。體內(nèi)外研究均發(fā)現(xiàn)，蛋白酶體抑制劑可使凋亡因子p53、p21、p27和Bax的活性增加，并通過阻斷IκB的泛素化降解，抑制存活因子NF-?B活性，具有抗增殖和促進凋亡作用。 本課題采用MTT比色法、流式細胞術、Hoechst 33258染色、DNA Ladder法觀察泛素蛋白酶體抑制劑MG-132對TGF-β1誘導的大鼠腎間質(zhì)成纖維細胞的增殖及凋亡變化，并應用Western Blot檢測相關蛋

3、白的變化，EMSA檢測NF-?B的活性，以探索其作用途徑和機制。 本研究第一部分結果顯示，與空白對照組比較，TGF-β1(5ng/ml）可促進NRK-49F細胞增殖，MG-132（0.25~5μM)呈劑量依賴性地抑制這種效應，使細胞生長停滯在G1期；TGF-β1（5ng/ml）單獨不能誘導NRK-49F的凋亡(3.8％±0.4％ vs 4.7％±1.6％)，而MG-132（0.1、0.25、0.5、0.75、1.0、2.5μM）

4、預處理可呈劑量依賴性地促進細胞凋亡；MG-132（2.5μM）+TGF-β1組及 MG-132（2.5μM）組在Hoechst染色下出現(xiàn)核固縮、核碎裂、凋亡小體等凋亡的特異的形態(tài)學改變，并在DNA電泳中呈典型的“梯狀”條帶。上述結果表示，TGF-β1(5ng/ml）可促進NRK-49F的增殖，而泛素蛋白酶體抑制劑MG-132對TGF-β1誘導的NRK-49F有抑制增殖和促進凋亡作用。 本研究第二部分結果顯示，MG-132可劑量依

5、賴性促進TGF-β1誘導的凋亡相關蛋白Caspase-3的活性片段產(chǎn)生，Bax表達上調(diào)和Bcl-2表達下調(diào)，激活細胞周期相關蛋白p21、p53，但對p27沒有明顯的影響；進一步研究顯示TGF-β1可促進ERK、JNK和p38蛋白磷酸化，而MG-132能抑制ERK的活化，并能進一步激活JNK和p38蛋白及其下游c-Jun1/2，30min達高峰；TGF-β1可時間依賴性地誘導IκB蛋白磷酸化，而MG-132能上調(diào)TGF-β1誘導的IκB磷

6、酸化、IκB蛋白表達及抑制NF-?B活性。提示MG-132可能通過上述途徑發(fā)揮對NRK-49F細胞的抑制增殖和誘導凋亡作用。因此MG-132具有潛在的抗腎間質(zhì)纖維化作用。 總之，本研究首次發(fā)現(xiàn)泛素蛋白酶體抑制劑MG-132可抑制腎間質(zhì)成纖維細胞增殖，并促其凋亡。該作用可能與MG-132對細胞周期相關蛋白，凋亡信號蛋白、MAPK通路及NF-?B途徑蛋白的調(diào)節(jié)有關，提示泛素蛋白酶體抑制劑可能成為將來防治腎間質(zhì)纖維化的一個潛在的治療手