澤瀉藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及其利尿作用研究.pdf

1、本研究以福建省道地藥材澤瀉為研究對(duì)象，采用硅膠層析、中壓制備液相、質(zhì)譜引導(dǎo)的高壓制備液相等技術(shù)手段對(duì)澤瀉化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)分析，采用液質(zhì)聯(lián)用和一測(cè)多評(píng)技術(shù)進(jìn)行澤瀉的質(zhì)量控制研究，運(yùn)用均勻設(shè)計(jì)法對(duì)其利尿作用活性成分組合進(jìn)行優(yōu)化研究。主要開展了以下研究?jī)?nèi)容:
　　1.采用軸向壓縮層析柱結(jié)合-MPLC、pHPLC、質(zhì)譜引導(dǎo)-pHPLC等多種分離純化技術(shù)分離制備澤瀉中主要活性成分。共分離得到24種化合物:十七烷酸、棕櫚酸、二十烷酸、β-谷

2、甾醇、11-去氧澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇B、澤瀉醇B、澤瀉醇G、23-乙酰澤瀉醇L、24-乙酰澤瀉醇A、澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇F、澤瀉醇L、13，17-環(huán)氧-23-乙酰澤瀉醇B、13，17-環(huán)氧澤瀉醇B、23-乙酰澤瀉醇C、澤瀉醇F、13，17-環(huán)氧-24-乙酰澤瀉醇A、13，17-環(huán)氧澤瀉醇A、16-羰基-11-脫水澤瀉醇A、澤瀉醇C、16-羰基-24-乙酰澤瀉醇A、16-羰基澤瀉醇A和16-羰基-11-去氧澤瀉醇A。初步探明了

3、澤瀉的物質(zhì)基礎(chǔ)。
　　2.首先采用HPLC-DAD-Q-TOF MS定性出澤瀉中25個(gè)成分，通過與對(duì)照品比對(duì)其紫外、精確分子量和質(zhì)譜裂解規(guī)律，鑒定出21種三萜類化合物，另外4種（其中16-羰基-11-去氧澤瀉醇A為新化合物）通過比對(duì)其紫外、精確分子量和質(zhì)譜裂解規(guī)律，被推斷出來。其次建立了UPLC-QqQ MS的定量分析方法，并應(yīng)用到20批主產(chǎn)地澤瀉藥材的定量測(cè)定中。進(jìn)一步闡明不同產(chǎn)地澤瀉的內(nèi)在化學(xué)成分的異同。
　　3.建立了

4、一測(cè)多評(píng)(QAMS)的澤瀉多指標(biāo)質(zhì)量控制方法，采用HPLC法，以23-乙酰澤瀉醇B為內(nèi)參物，計(jì)算澤瀉醇A、24-乙酰澤瀉醇A和澤瀉醇B的相對(duì)校正因子，并利用該校正因子計(jì)算含量，同時(shí)與采用外標(biāo)法測(cè)定4個(gè)三萜類成分的含量進(jìn)行比較。結(jié)果:建立的校正因子重現(xiàn)性良好，31批澤瀉藥材中4個(gè)三萜類的含量計(jì)算值與外標(biāo)法實(shí)測(cè)值間（RSD≤3.52％）無顯著差異。證明建立的一測(cè)多評(píng)法穩(wěn)定、準(zhǔn)確，可用于澤瀉三萜類成分的質(zhì)量控制。解決了澤瀉質(zhì)量控制中對(duì)照品難得

5、，貨源不足或價(jià)格昂貴等問題。
　　4.采用代謝籠法研究澤瀉三萜類成分的利尿作用，得出三萜類成分是其利尿藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。在遵循組分配伍研究設(shè)計(jì)的基礎(chǔ)上，采用均勻設(shè)計(jì)法，以尿量為主要藥效指標(biāo)，研究澤瀉利尿作用。優(yōu)化出最佳的利尿活性組合23-乙酰澤瀉醇B:澤瀉醇B:24-乙酰澤瀉醇A:澤瀉醇A:23-乙酰澤瀉醇C(7.4∶4.4∶2.0∶1.4∶1.1)，并進(jìn)行三次驗(yàn)證，結(jié)果優(yōu)化的最優(yōu)組合與軟件計(jì)算的預(yù)期值接近，結(jié)合建澤瀉、川澤瀉含量測(cè)定