PKC對(duì)Jurkat細(xì)胞中hsp90基因表達(dá)調(diào)控的研究.pdf

1、在細(xì)胞應(yīng)答熱休克過(guò)程中最早期的事件是將脅迫信號(hào)從細(xì)胞表面?zhèn)髦良?xì)胞內(nèi),從而誘導(dǎo)熱休克蛋白的合成使細(xì)胞產(chǎn)生對(duì)熱的耐受性.Hsp90是熱休克蛋白家族中一類(lèi)獨(dú)特的、含量豐富的并對(duì)細(xì)胞存活必不可少的胞質(zhì)蛋白.它參與調(diào)節(jié)包括基因轉(zhuǎn)錄、細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、凋亡等許多重要的生理過(guò)程.因此研究參與熱休克誘導(dǎo)的hsp90的基因表達(dá)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑將有助于對(duì)Hsp90在熱脅迫中的分子功能的理解.蛋白激酶C(PKC)是一類(lèi)絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,它不僅

2、在將外界刺激信號(hào)從細(xì)胞表面?zhèn)髦良?xì)胞內(nèi)的過(guò)程中起了關(guān)鍵的作用,同是也是許多信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的一個(gè)中央樞紐.它還可調(diào)節(jié)許多生物功能包括細(xì)胞增殖、分化和凋亡等.該研究則主要探討了PKC和熱休克蛋白Hsp90在熱休克應(yīng)答過(guò)程中兩者之間的關(guān)系.該論文首先PKC對(duì)熱休克誘導(dǎo)的Jurkat細(xì)胞中hsp90基因表達(dá)的調(diào)節(jié),包括了不同的PKC抑制劑對(duì)熱休克誘導(dǎo)的hsp90的mRNA水平和啟動(dòng)子活性的影響.在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步觀察了熱休克對(duì)Jurkat細(xì)胞中的PK

3、C在細(xì)胞中定位的影響.然后將顯性負(fù)突變PKC-ε質(zhì)粒(DN-PKC-ε)和組成性活化PKC-ε質(zhì)粒(CA-PKC-ε)等真核表達(dá)質(zhì)鑿瞬時(shí)轉(zhuǎn)染到Jurkat細(xì)胞中,通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)性RT-PCR的方法證實(shí)PKC-ε在熱休克誘導(dǎo)的hsp90β的基因表達(dá)中起了一個(gè)關(guān)鍵的作用.最后應(yīng)用免疫共沉淀的方法觀察了PKC-ε和Hsp90β是否存在直接的相互作用.此外,根據(jù)Hsp90不同的功能結(jié)構(gòu)域一系列的hsp90的真核表達(dá)亞克隆和原核表達(dá)亞克隆被構(gòu)建成功,為