喉癌組織中MKRN1和HSP90基因表達(dá)的研究.pdf

1、前言目前研究發(fā)現(xiàn)，端粒酶活性在大多數(shù)永生細(xì)胞及腫瘤細(xì)胞中表達(dá)增強(qiáng)，與腫瘤的發(fā)生有著密切的關(guān)系。端粒酶由端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶(humantelomerasereversetranscriptase，hTERT)、端粒RNA(telomeraseRNA)和端粒相關(guān)蛋白1(TP1)組成。其中hTERT是調(diào)控端粒酶活性和端粒長(zhǎng)度的主要因素，在細(xì)胞永生化和惡性轉(zhuǎn)化中起關(guān)鍵作用。hTERT的功能受諸多因素的影響，MKRN1(MakorinRINGfing

2、erprotein1，MKRN1)基因的編碼產(chǎn)物是hTERT降解過(guò)程中的關(guān)鍵酶，MKRN1基因的過(guò)表達(dá)可促進(jìn)hTERT的降解，降低端粒酶的活性和端粒的長(zhǎng)度。熱休克蛋白90(heatshockprotein90，HSP90)能夠與hTERT結(jié)合并促進(jìn)其活性，使端粒增長(zhǎng)，抑制Hsp90的功能將促進(jìn)端粒酶降解。在正常細(xì)胞中MKRN1和HSP90基因的表達(dá)保持動(dòng)態(tài)平衡，端粒酶活性和端粒長(zhǎng)度受這一平衡的調(diào)節(jié)。目前MKRN1和HSP90基因與腫瘤發(fā)

3、生的相關(guān)性，以及二者相互作用還不十分清楚。因此，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)MKRN1和HSP90基因在喉鱗狀細(xì)胞癌(以下簡(jiǎn)稱喉癌)組織及癌旁正常對(duì)照組織中的表達(dá)，以探討MKRN1和HSP90基因的相關(guān)性及二者在喉癌發(fā)生發(fā)展中的作用。 實(shí)驗(yàn)方法1.材料1.135例喉癌組織標(biāo)本來(lái)源于中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一臨床學(xué)院耳鼻喉科手術(shù)切取標(biāo)本。術(shù)前未經(jīng)化療或放療，術(shù)后經(jīng)病理證實(shí)均為鱗狀細(xì)胞癌。 1.2總RNA提取相關(guān)試劑。 1.3RT-PCR相

4、關(guān)試劑。 2.方法：分別取喉癌及癌旁正常對(duì)照組織約100mg，提取總RNA，選取OD260/OD280＞1.8的樣品用于反轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再以cDNA為模板以β-actin為內(nèi)對(duì)照分別擴(kuò)增MKRN1和HSP90基因，取10μlPCR產(chǎn)物經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳，并在GelScan2Xl凝膠圖像成像儀上掃描，以DNAMarkerDL2000為標(biāo)準(zhǔn)記錄各特異性cDNA擴(kuò)增帶密度，以目的基因的cD-NA擴(kuò)增片段密度與相應(yīng)的內(nèi)參照β-

5、actin擴(kuò)增片段密度的比值作為其mRNA表達(dá)水平的定量指標(biāo)。數(shù)據(jù)采用SPSS10.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果1.35例喉癌中有18例MKRN1基因mRNA表達(dá)下調(diào)，占51.4％(18/35)，16例HSP90基因mRNA表達(dá)上調(diào)，占45.7％(16/35)。MKRN1基因在喉癌組織中的表達(dá)水平低于癌旁正常對(duì)照組織(P＜0.01)，HSP90基因在喉癌組織中的表達(dá)高于癌旁正常對(duì)照組織(P＜0.05)，差異均有顯著性。