AKF-PD抗心肌梗死后心肌纖維化作用及其機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:觀察AKF-PD對(duì)心肌梗死大鼠心肌纖維化的預(yù)防性治療作用;并采用新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞(CFs)的實(shí)驗(yàn)，進(jìn)一步研究AKF-PD是否通過絲裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated proteinkinase，MAPK)通路影響轉(zhuǎn)化生長因子-β1(TGF-β1)誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞活化以及纖維連接蛋白（fibronectin，F(xiàn)N）表達(dá)，以探討AKF-PD抗心肌纖維化的作用機(jī)制。
　　 方法:112只雄性SD大鼠隨

2、機(jī)分為心肌梗死組(n=104)、假手術(shù)組(n=8)。冠脈結(jié)扎術(shù)后將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組、AKF-PD高劑量組（500mg/kg/d）、AKF-PD中劑量組(250mg/kg/d)、AKF-PD低劑量組（125mg/kg/d）、培哚普利組(2mg/kg/d)。藥物干預(yù)5周后，留取各組大鼠左室心肌組織，稱量左室重量，計(jì)算左室重量指數(shù)（LVWI，左室重量mg/體重g）;并進(jìn)行Masson、HE染色，并計(jì)算非梗死區(qū)心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(CV

3、F)、血管周圍膠原面積與管腔面積的比值（PVCA/VA）;采用免疫組織化學(xué)法檢測各組大鼠非梗死區(qū)心肌組織Ⅰ型膠原陽性面積百分比。
　　 分離、培養(yǎng)CFs，①用不同濃度TGF-β1(5 ng/ml,10 ng/ml，15ng/ml)作用24小時(shí)，用MTT法檢測其增殖;②將細(xì)胞分為對(duì)照組、TGF-β1組(10 ng/ml)、AKF-PD組(TGF-β1+2mM AFK-PD),10 ng/mlTGF-β1刺激24小時(shí)后，用MTT法檢

4、測其增殖;③將細(xì)胞分為對(duì)照組、TGF-β1組(10 ng/ml)、AKF-PD組(TGF-β1+2 mM AFK-PD)、 PD98059組（TGF-β1+25μM PD98059）、SB203580組(TGF-β1+10μMSB203580)以及c-Jun N-末端激酶(JUN) inhibitorⅡ組(TGF-β1+10μM JNK inhibitorⅡ)，TGF-β1(10 ng/ml)刺激24小時(shí)后，用Westernblot法檢

5、測各組α-平滑肌肌動(dòng)蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）、FN蛋白的表達(dá);④將細(xì)胞分為對(duì)照組、TGF-β1組（10ng/ml）、AKF-PD組(TGF-β1+2mM AFK-PD)、PD98059組(TGF-β1+25μM PD98059),TGF-β1(10ng/ml)刺激60分鐘后，用Western blot方法檢測各組ERK1/2、磷酸化ERK1/2(pERK1/2)蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:1.

6、與假手術(shù)組比較，模型組LVWI明顯增加(P＜0.05);與模型組比較，AKF-PD高劑量組、培哚普利組LVWI明顯減少(P＜0.05);與培哚普利組比較，AKF-PD各劑量組LVWI均有所增加。2.與假手術(shù)組比較，模型組CVF明顯增高(P＜0.05);與模型組比較，AKF-PD各劑量組與培哚普利組CVF均降低，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與假手術(shù)組比較，模型組的PVCA/VA值均明顯增高(P＜0.05);與模型組比較，AKF-PD低劑量組與培哚普利組

7、的PVCA/VA值均明顯降低(P＜0.05)。3.與假手術(shù)組比較，模型組心肌組織Ⅰ型膠原陽性面積百分比均明顯增加(P＜0.05);與模型組比較，AKF-PD高劑量組與培哚普利組心肌組織Ⅰ型膠原陽性面積百分比均明顯減少(P＜0.05);而與培哚普利組比較，AKF-PD各劑量組心肌組織Ⅰ型膠原陽性面積百分比均稍增加，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 與對(duì)照組相比，不同濃度TGF-β1均可顯著促進(jìn)心肌成纖維細(xì)胞的增殖(P＜0.05);與對(duì)照組相

8、比，TGF-β1組心肌成纖維細(xì)胞增殖明顯增加(P＜0.05);與TGF-β1組相比，AKF-PD組心肌成纖維細(xì)胞增殖明顯減低(P＜0.05)。
　　 與對(duì)照組相比，TGF-β1組α-SMA蛋白表達(dá)均明顯增加(P＜0.01);與TGF-β1組相比，AKF-PD組、PD98059組、SB203580組α-SMA蛋白表達(dá)均明顯減低(P＜0.05)，而JNK inhibitorⅡ組α-SMA蛋白表達(dá)雖然有所減低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

9、　　 與對(duì)照組相比，TGF-β1組FN蛋白表達(dá)明顯增加(P＜0.05);與TGF-β1組相比，AKF-PD組FN蛋白表達(dá)明顯減低了約69％(P＜0.05);此外，PD98059組、JNK inhibitorⅡ組FN蛋白表達(dá)均明顯減低(P＜0.05)，而SB203580組FN蛋白表達(dá)未受到抑制。
　　 與對(duì)照組相比，TGF-β1組pERK1/2的蛋白表達(dá)明顯增加(P＜0.001);與TGF-β1組相比，AKF-PD組及PD980

10、59組pERK1/2的蛋白表達(dá)明顯減低(P＜0.001)。
　　 結(jié)論:AKF-PD可降低心肌梗死大鼠心肌膠原的沉積，減輕心肌小血管重塑，對(duì)心肌梗死后大鼠心肌纖維化有預(yù)防性治療作用，AKF-PD不僅可抑制TGF-β1誘導(dǎo)的新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞增殖，還可抑制TGF-β1誘導(dǎo)的新生大鼠心肌成纖維細(xì)胞α-SMA、FN的表達(dá)以及ERK1/2的磷酸化，提示AKF-PD可通過ERK信號(hào)傳導(dǎo)通路抑制TGF-β1誘導(dǎo)的心肌成纖維細(xì)胞-肌成纖維