人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與環(huán)孢素相互作用的研究.pdf

1、目的：隨著對間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cell，MSC)多向分化潛能及免疫調(diào)節(jié)特性的深入研究，間充質(zhì)干細(xì)胞已成為組織工程和再生醫(yī)學(xué)細(xì)胞治療的主要候選干細(xì)胞之一，同時也被越來越多的應(yīng)用到異基因造血干細(xì)胞移植(allogeneic haematopoietic stem cell transplantation，Allo-HSCT)中，用來防治移植物抗宿主疾病(graft-versus-host disease，GVH

2、D)的發(fā)生。環(huán)孢素(Cyclosporine A，CsA)作為免疫抑制劑的代表，在腎移植、骨髓移植等器官移植中有廣泛的使用，明顯降低了移植物排異的發(fā)生，使器官移植學(xué)能夠進(jìn)一步的發(fā)展；但是環(huán)孢素用藥時間長，肝腎、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等重要臟器的毒副作用大，需要頻繁監(jiān)測血藥濃度來調(diào)整劑量，所以環(huán)孢素與其它免疫抑制劑聯(lián)合應(yīng)用受到推薦，聯(lián)合用藥在不影響免疫抑制作用的同時，降低了環(huán)孢素的使用劑量，減少了不良反應(yīng)的發(fā)生。本實驗旨在研究臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(um

3、bilical cord mesenchymal stem cell，UC-MSC)對T淋巴胞的活化增殖的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)，以及與環(huán)孢素之間的相互作用，特別是二者在免疫抑制方面是否有協(xié)同效應(yīng)，為指導(dǎo)臨床用藥提供一定的理論基礎(chǔ)。
　　方法：用MTT的方法檢測環(huán)孢素對MSC增殖的影響；用流式細(xì)胞儀檢測環(huán)孢素對MSC凋亡及細(xì)胞周期影響；PHA刺激下的人外周血單個核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cell，PB

4、MC)與人臍帶MSC共培養(yǎng)，實驗組加入不同濃度的環(huán)孢素，通過ELISA的方法檢測人外周血單個核細(xì)胞IFN-γ的分泌情況來觀察臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞或/和環(huán)孢素的免疫調(diào)節(jié)效應(yīng)。
　　結(jié)果：單獨(dú)應(yīng)用不同濃度的環(huán)孢素(30ng/ml、60ng/ml、120ng/ml、240ng/ml、480ng/ml)對臍帶MSC增殖的抑制率與無藥對照組之間無顯著差異(P>0.05)。小劑量環(huán)孢素(30ng/ml、60ng/ml、120ng/ml)作用臍帶間

5、充質(zhì)干細(xì)胞72h后，MSC的凋亡率分別為13.26％、14.76％、18.59％，各組之間無顯著差異(P>0.05)，各組凋亡率均顯著高于無藥物作用下的MSC凋亡率(0.27％)；大劑量環(huán)孢素(240ng/ml、480ng/ml)作用臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞72h后，MSC的凋亡率分別為37.58％和57.14％，均顯著高于無藥對照組及小劑量組。臍帶MSC經(jīng)過含有環(huán)孢素的培養(yǎng)基培養(yǎng)72h后，隨環(huán)孢素濃度的增加，各實驗組G0/G1期細(xì)胞比值逐漸降

6、低，而S期細(xì)胞比值逐漸升高，G2期變化不明顯；且G0/G1期及S期與對照組相比，差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；提示環(huán)孢素可明顯促進(jìn)臍帶MSC增殖，促進(jìn)細(xì)胞G0/G1期進(jìn)入S期。在MSC與PBMC共培養(yǎng)體系中，MSC組IFN-γ的分泌顯著低于無MSC組(P<0.05)，且高濃度MSC組IFN-γ的分泌顯著低于低濃度MSC組，即臍帶MSC能夠有效抑制PHA刺激下PBMCIFN-γ的分泌，并與MSC濃度呈正相關(guān)；等量的PBMC在PHA

7、刺激下，MSC組、CsA組、MSC+CsA組的IFN-γ分泌分別為506.5pg/ml、213 pg/ml、150pg/ml，均顯著低于對照組(PBMC+PHA)的1337 pg/ml，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)，且各實驗組間IFN-γ分泌為：MSC組>CsA組>MSC+CsA組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。
　　結(jié)論：臍帶MSC能有效抑制PHA刺激下T淋巴細(xì)胞的IFN-γ分泌，并呈現(xiàn)出MSC濃度依賴性，提示其對T