酸性環(huán)境對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的影響.pdf

1、間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cell，MSCs)是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細(xì)胞，因能分化為間質(zhì)組織而得名，在特定的體內(nèi)外環(huán)境下，能夠誘導(dǎo)分化成為多種組織細(xì)胞。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞(Human UmbilicalCord Mesenchymal Stem Cell，HUMSCs)來源于新生兒臍帶華通氏膠，取材方便，來源廣泛、不受倫理限制、免疫原性低、體外增殖能力強(qiáng)等特點(diǎn)，因此，HUMSCs作為細(xì)胞治療中的種

2、子細(xì)胞成為近年來再生醫(yī)學(xué)，細(xì)胞移植及癌癥治療的研究熱點(diǎn)。研究表明在局部缺血和炎癥環(huán)境中，如呼吸道過敏性哮喘、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、動(dòng)脈粥樣硬化、腫瘤微環(huán)境等，由于低氧誘導(dǎo)發(fā)生無氧糖酵解，導(dǎo)致乳酸積累，進(jìn)而引起胞外環(huán)境的酸化，不利于正常組織細(xì)胞生存。而HUMSCs作為種子細(xì)胞用于細(xì)胞治療的機(jī)理尚未有相關(guān)報(bào)道，本研究選用HUMSCs為細(xì)胞模型，體外模擬病理性酸性環(huán)境，探討酸性環(huán)境對HUMSCs的存活與遷移能力的影響，同時(shí)初步研究HUMSCs在酸性

3、條件下的細(xì)胞應(yīng)答機(jī)制。
　　方法:采用“爬片”分離獲得HUMSCs;流式細(xì)胞術(shù)檢測HUMSCs的表面標(biāo)記物;Real-time PCR檢測HUMSCs中四種質(zhì)子感知受體(TDAG8，GPR4，OGR1和G2A)的表達(dá);Real-time PCR檢測酸性條件刺激下HUMSCs中四種質(zhì)子感知受體（TDAG8,GPR4，OGR1和G2A）的表達(dá);MTT法檢測 HUMSCs在酸性條件下的存活能力;Micro Chemotaxis Cham

4、ber法檢測HUMSCs在酸性條件下的遷移能力。
　　結(jié)果:利用爬片法成功分離培養(yǎng)獲得HUMSCs，流式細(xì)胞儀檢測顯示HUMSCs高表達(dá)CD105、CD90、CD73、CD29，低表達(dá)CD45、CD34和HLA-DR。Real Time PCR檢測發(fā)現(xiàn)HUMSCs細(xì)胞中GPR4受體的相對表達(dá)量顯著高于其它幾個(gè)受體（P口0.01）。其次是TDAG8和OGR1受體的表達(dá)量(TDAG8＞OGRl)，G2A幾乎不表達(dá)。Real Time

5、PCR檢測發(fā)現(xiàn)TDAG8在pH6.8時(shí)高表達(dá);MTT法檢測結(jié)果顯示在pH6.8、pH7.2、pH7.6條件下，人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的細(xì)胞存活率沒有顯著性;Micro Chemotaxis Chamber法檢測pH6.8刺激HUMSCs促進(jìn)細(xì)胞遷移。
　　結(jié)論:在酸性環(huán)境中人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞高表達(dá)質(zhì)子感知受體TDAG8，并且在酸性環(huán)境中，HUMSCs可以存活，即人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞能夠適應(yīng)酸性環(huán)境，同時(shí)酸性刺激促進(jìn)HUMSCs遷移。該研