SIRT1通過LXR及NF-κB信號通路抑制泡沫細(xì)胞的形成.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:建立U937泡沫細(xì)胞模型,對比觀察能量限制(CR)和高脂加氧化型低密度脂蛋白誘導(dǎo)對人單核細(xì)胞內(nèi)脂肪積累和SIRT1基因表達(dá)的影響;探討SIRT1信號通路是否參與泡沫細(xì)胞形成的調(diào)節(jié)機(jī)制及是否通過調(diào)節(jié)LXR和NF-κB抑制泡沫細(xì)胞的形成。
  方法:用含有不同濃度軟脂酸鈉的培養(yǎng)基培養(yǎng)單核細(xì)胞,并利用四氮唑藍(lán)檢測法(3-(4,5-dimetrylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromi

2、de,MTT)確定一個對于細(xì)胞損傷較小且效果最好的藥物作用濃度。分別利用低糖(能量限制組、CR組)、高糖(對照組)、高脂(軟脂酸鈉組)、高脂加氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)不同培養(yǎng)基培養(yǎng)單核細(xì)胞,油紅O對細(xì)胞進(jìn)行脂肪染色,定性定量檢測細(xì)胞內(nèi)脂肪積累情況。然后在同樣模型的基礎(chǔ)上,分別提取細(xì)胞內(nèi)mRNA和蛋白質(zhì),進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄PCR和Western blot檢測,觀察不同組間SIRT1、LXR和NF-κB基因和蛋白的表達(dá)情況。最后在高脂加低密

3、度脂蛋白模型中加入SIRT1激動劑SRT1720及SIRT1抑制劑尼克酰胺,在基因和蛋白水平觀察LXR及其下游靶分子ABCA1,ABCG1,CCR7和NF-κB及其下游靶分子TNFα,IL-1β的表達(dá)情況。
  結(jié)果:MTT的檢測結(jié)果顯示,2.0mM的軟脂酸鈉是一個合適的藥物作用濃度。觀察細(xì)胞內(nèi)脂肪積累的試驗結(jié)果顯示,高糖誘導(dǎo)所產(chǎn)生的細(xì)胞內(nèi)脂肪積累沒有顯著性變化,CR組的細(xì)胞內(nèi)脂肪積累顯著少于其他三組,高脂誘導(dǎo)下的細(xì)胞內(nèi)脂肪積累顯

4、著高于其他三組。RT-PCR和Western blot的試驗檢測結(jié)果表明,與高糖培養(yǎng)和高脂培養(yǎng)情況下不同的是,CR情況下,SIRT1、LXRa及其靶分子的表達(dá)增加,而NF-κB及其靶分子的表達(dá)降低。與高糖培養(yǎng)情況下相比,高脂培養(yǎng)可以促使SIRT1及LXRa及其靶分子ABCA1,ABCG1,CCR7的表達(dá)降低,可使NF-κB及其靶分子TNFα,IL-1β的表達(dá)增加。在高脂加低密度脂蛋白培養(yǎng)情況下,SRT1720作用可以促使SIRT1、LX

5、Ra及其靶分子ABCA1,ABCG1,CCR7的表達(dá)增加,但NF-κB及其靶分子TNFα,IL-1β的表達(dá)降低,同時細(xì)胞的泡沫化進(jìn)程被阻止。SIRT1的抑制劑尼克酰胺可以抵消SRT1720的上述作用。
  結(jié)論:在高脂尤其是高脂加氧化型低密度脂蛋白培養(yǎng)條件下,人單核細(xì)胞內(nèi)積累了大量的脂肪,在單核細(xì)胞泡沫化的進(jìn)程中,SIRT1基因的表達(dá)發(fā)生了顯著變化,LXR及其下游靶分子ABCA1,ABCG1,CCR7隨著SIRT1表達(dá)的增強而增強

6、,而NF-κB及其下游靶分子TNFα,IL-1β隨著SIRT1表達(dá)的增強而減弱。我們的實驗證實了在泡沫細(xì)胞的形成過程中SIRT1信號被抑制,并且SIRT1可能通過激活LXR-ABCA1/ABCG1/CCR7信號通路和抑制NF-κB信號通路阻止單核細(xì)胞向泡沫細(xì)胞發(fā)展。能量限制條件下,該通路至少是能量限制阻止單核細(xì)胞向泡沫細(xì)胞發(fā)展的重要原因之一。為探究長壽基因SIRT1在動脈粥樣硬化形成過程中調(diào)控機(jī)制提出了一個新的思路,為該病的防治提供了更

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