喹硫平改善腦皮質(zhì)發(fā)育不良大鼠神經(jīng)發(fā)育功能及其機(jī)制研究.pdf

1、難治性癲癇是目前醫(yī)學(xué)所面臨的巨大難題,嚴(yán)重危害人類健康。其發(fā)病機(jī)制迄今仍不清楚,腦皮質(zhì)發(fā)育不良是兒童期難治性癲癇的重要病因。研究發(fā)現(xiàn),髓鞘發(fā)育異常是形成腦皮質(zhì)發(fā)育不良的主要原因之一。髓鞘在出生后形成,髓鞘化完成,才能將電活動(dòng)順利精確的傳導(dǎo),使大腦行使正常的功能,是大腦發(fā)育成熟的標(biāo)志。大鼠胚胎期遭受射線照射可出現(xiàn)髓鞘的脫失或者缺如,形成腦皮質(zhì)發(fā)育不良,是其出生后癲癇發(fā)生的重要因素。另外,髓鞘發(fā)育異常與認(rèn)知功能障礙密切相關(guān)。研究顯示,抗精神

2、病藥物喹硫平可促進(jìn)髓鞘的形成、保護(hù)髓鞘的脫失。我們推測(cè),喹硫平可改善腦皮質(zhì)發(fā)育不良大鼠髓鞘損傷、促進(jìn)其髓鞘發(fā)育,從而降低其癲癇易感性,并改善其認(rèn)知功能。為證實(shí)這一假說(shuō),我們將胚胎期接受射線照射的仔鼠,給予喹硫平干預(yù)治療。從組織病理學(xué)、分子生物學(xué)及行為學(xué)方面觀察其髓鞘的脫失及發(fā)育情況、癲癇的發(fā)作狀況和認(rèn)知功能。本課題的完成,將為癲癇的防治提供新的思路。
　　目的:
　　證實(shí)喹硫平可減少腦皮質(zhì)發(fā)育不良大鼠髓鞘脫失,促進(jìn)其髓鞘發(fā)育

3、,改善其生長(zhǎng)發(fā)育以及認(rèn)知功能,并降低其癲癇易感性。
　　方法:
　　通過(guò)1.8Gy鈷60-γ射線照射孕16天的母鼠,建立腦皮質(zhì)發(fā)育不良的動(dòng)物模型。按照是否給藥,將其分為4組:對(duì)照組、腦皮質(zhì)發(fā)育不良模型組、腦皮質(zhì)發(fā)育不良模型+生理鹽水組和腦皮質(zhì)發(fā)育不良模型+喹硫平給藥組。分別利用HE染色、尼氏染色(Nissl)、免疫組織化學(xué)以及免疫印跡等方法,觀察各組髓鞘的表達(dá);進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試,觀測(cè)運(yùn)動(dòng)能力和認(rèn)知功能;應(yīng)用戊四氮(PTZ)誘導(dǎo)

4、癲癇發(fā)作,觀察各組癲癇發(fā)作狀況。
　　結(jié)果:
　　1.孕鼠在孕16天時(shí)接受1.8Gy的γ射線照射后,大約有10.7％的仔鼠出現(xiàn)自發(fā)性抽搐發(fā)作,而其他的仔鼠也表現(xiàn)出不同程度的興奮性行為,組織病理結(jié)果顯示模型組動(dòng)物的皮質(zhì)變薄、分層結(jié)構(gòu)紊亂、海馬的CA1區(qū)、CA3區(qū)、CA4區(qū)出現(xiàn)結(jié)構(gòu)紊亂以及結(jié)節(jié)樣結(jié)構(gòu),并出現(xiàn)髓鞘的缺失和發(fā)育延遲。隨著時(shí)間的推移,大腦皮質(zhì)和胼胝體的髓鞘增加,但射線照射組髓鞘明顯低于對(duì)照組。以上結(jié)果提示我們成功的構(gòu)建

5、了腦皮質(zhì)發(fā)育不良動(dòng)物模型。
　　2.喹硫平給藥組仔鼠的腦質(zhì)量和體重都明顯高于腦皮質(zhì)發(fā)育不良模型組,但是略低于對(duì)照組。提示喹硫平給藥組其發(fā)育延遲也得到了明顯的改善。
　　3.行為學(xué)觀測(cè)中,曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)顯示,喹硫平改善了腦皮質(zhì)發(fā)育不良大鼠的活動(dòng)能力和探索行為;高架實(shí)驗(yàn)顯示,喹硫平明顯改善腦皮質(zhì)發(fā)育不良大鼠的活動(dòng)能力;物體識(shí)別測(cè)試中,喹硫平提高了腦皮質(zhì)發(fā)育不良大鼠探索物體的能力;水迷宮測(cè)試中,喹硫平明顯縮短了腦皮質(zhì)發(fā)育不良大鼠到達(dá)平臺(tái)

6、的潛伏期。
　　4.戊四氮(PTZ)誘導(dǎo)癲癇發(fā)作研究中,喹硫平給藥組較模型組誘發(fā)強(qiáng)直-陣攣發(fā)作需要更高的戊四氮?jiǎng)┝?且其誘導(dǎo)全面強(qiáng)直-陣攣發(fā)作的平均潛伏期延長(zhǎng);并延長(zhǎng)最小發(fā)作與全面發(fā)作之間的時(shí)間間隔。提示喹硫平明顯降低了腦皮質(zhì)發(fā)育不良大鼠的癲癇易感性。
　　5.MBP免疫組織化學(xué)染色顯示,喹硫平給藥組與腦皮質(zhì)發(fā)育不良模型組相比,大腦皮質(zhì)和胼胝體的髓鞘明顯增多,和對(duì)照組沒(méi)有明顯的差異。WesternBlot的結(jié)果與免疫組織化學(xué)