1,25(OH)2D3抑制肝癌細胞HDAC2活性及促進p21WAFI-CIP1表達的研究.pdf

1、目的：
　　本課題通過研究1,25(OH)2D3對肝癌細胞中組蛋白去乙?；?（HDAC2）的抑制作用和細胞周期蛋白的表達情況，探討1,25(OH)2D3是否通過抑制HDAC2表達來促進了p21 WAFI／CIP1高表達，致使人肝癌細胞株停滯于GO/GI期，從而調(diào)節(jié)肝癌細胞的增殖和分化。
　　方法：
　　本課題首先培養(yǎng)人肝癌細胞株（HpG2）,用CCK-8試劑盒檢測1,25(OH)2D3對細胞的增殖抑制作用，得出1,2

2、5（OH）2D3對肝癌細胞的抑制率的趨勢；在不同時間點和不同濃度梯度用1,25（OH）2D3來處理細胞，提取細胞的核蛋白和RNA，并用RT-PCR技術(shù)檢測p21WAFI／CIP1和HDAC2的mRNA水平，用Western blot印跡技術(shù)檢測HDAC2和p21WAFI／CIP1蛋白的表達。
　　結(jié)果：
　　1、CCK-8試劑盒檢測顯示1,25（OH）2D3對肝癌細胞有抑制作用，并隨著加藥時間的延長和藥物濃度的增加，抑制率呈

3、現(xiàn)明顯升高趨勢，且各濃度實驗組和對照組比較，差異都具有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、用核蛋白試劑盒和RNA提取試劑盒成功提取出加藥組.乙醇組和對照組的核蛋白和RNA。
　　3、RT-PCR檢測出在加藥后的24H，48H，72H隨著1,25（OH）2D3濃度的增高，HDAC2的mRNA表達水平呈降低趨勢，各時間點的對照組和實驗組差異有統(tǒng)計學(xué)意義;加藥后的24H，48H，72H隨著1,25（OH）2D3濃度的增高，p21WAFI／CIP

4、1的mRNA表達水平呈升高趨勢。
　　4、Western blot印跡技術(shù)檢測在加藥后的24H，48H，72H隨著1,25（OH）2D3濃度的增高，HDAC2的蛋白表達水平呈降低趨勢，各時間點的對照組和實驗組差異有統(tǒng)計學(xué)意義;加藥后的24H，48H，72H隨著1,25（OH）2D3濃度的增高，p21WAFI／CIP1的蛋白表達水平呈升高趨勢。
　　結(jié)論：
　　1、1,25（OH）2D3對肝癌細胞的增殖有抑制作用。