DNA疫苗pVAX1-rgpA、Pvax1-IL-4預(yù)防牙周炎的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 牙周炎是一種發(fā)生在牙周支持組織的感染性疾病，到目前為止，其在世界范圍內(nèi)均有較高的發(fā)生率，也是導(dǎo)致牙齒喪失的主要原因之一。牙齦卟啉單胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.g)是目前公認的牙周致病菌。牙齦素(gingipains)是由Pg分泌的存在于Pg外膜、膜泡或胞外的一組蛋白酶，包括精氨酸-牙齦素(Arginine-gingipains，Rgps)和賴氨酸-牙齦素(Lysine-gingipai

2、n，Kgp)。精氨酸牙齦素A是破壞宿主組織的重要毒力因子，并且牙齦卟啉單胞菌在牙周組織的粘附定植、侵襲破壞宿主細胞、影響機體免疫平衡等方面發(fā)揮著重要作用，同時還具有良好的免疫原性。白細胞介素4促進th0細胞向th2細胞分化，進而活化B細胞，促進機體的體液免疫。本實驗旨在構(gòu)建牙齦卟啉單胞菌精氨酸牙齦素A和人白細胞介素4真核表達質(zhì)粒，作為基因疫苗注射到大鼠體內(nèi)，促進其產(chǎn)生牙齦卟啉單胞菌的特異性抗體，同時產(chǎn)生細胞因子白細胞介素4，聯(lián)合發(fā)揮預(yù)防

3、牙周炎的作用。
　　 方法:
　　 1通過聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)擴增基因rgpA和IL-4，將其各自插入真核質(zhì)粒pVAX-1，構(gòu)建重組質(zhì)粒pVAX1-rgpA、pVAX1-IL-4。
　　 2將32只大鼠隨機分為A、B、C、D4組，分別采用肌肉注射法給予基因疫苗TEbuffer、pVAX1、pVAX1-rgpA、pVAX1-rgpA+pVAX1-IL-4。
　　 3建立實驗性牙周炎模型。
　　

4、4記錄各組牙周狀況，收集血液樣本，采用ELISA方法分別檢測血清中IgG的抗體水平。
　　 5統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果:
　　 本實驗成功構(gòu)建真核表達質(zhì)粒pVAX1-rgpA和pVAX1-IL-4。Elisa結(jié)果顯示:C組IgG水平明顯高于(P＜0.05)A組和B組;D明顯高于C組(P＜0.05)。A、B兩組無統(tǒng)計學(xué)差異。X線片見A組和B組牙槽骨吸收明顯，而剩余于兩組較輕，牙周探查結(jié)果顯示C、D牙周袋深度較A、B