牡蠣糖胺聚糖抗病毒作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：觀察牡蠣糖胺聚糖(0-GAG)對(duì)單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的抑制作用以及對(duì)免疫功能的影響，初步探討牡蠣糖胺聚糖(0-GAG)的抗病毒作用機(jī)理。 方法：1、以非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero細(xì)胞)為宿主細(xì)胞，采用體外細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，通過(guò)細(xì)胞病變法(CPE)和MTT比色法，觀察不同濃度0-GAG體外給藥對(duì)單純皰疹病毒Ⅰ型(HSV-ⅠSM44株)的直接殺傷作用、對(duì)病毒復(fù)制的抑制作用以及對(duì)HSV-Ⅰ感染細(xì)胞的綜合作用等。采用體外細(xì)胞培養(yǎng)

2、技術(shù)，觀察0-GAG體外給藥在50-1600μg/ml濃度范圍內(nèi)對(duì)Vero細(xì)胞的毒性作用。 2、利用小鼠建立HSV-Ⅰ病毒感染的動(dòng)物模型，通過(guò)觀察不同濃度0-GAG經(jīng)注射給藥后對(duì)病毒感染小鼠的體重變化、平均存活時(shí)間和生命延長(zhǎng)率、死亡率的影響。采用病理組織學(xué)方法，觀察0-GAG經(jīng)注射給藥后對(duì)病毒感染小鼠的心、腦、肝、脾、腎、肺等重要臟器形態(tài)學(xué)的影響。 3、采用HSV-Ⅰ病毒感染的小鼠模型，觀察不同濃度0-GAG注射給藥后，

3、病毒感染小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)的變化；采用巨噬細(xì)胞吞噬中性紅試驗(yàn)，觀察不同濃度0-GAG對(duì)病毒感染小鼠腹腔巨噬細(xì)胞(PMφ)吞噬能力的影響；采用MTT法，觀察不同濃度0-GAG對(duì)病毒感染小鼠對(duì)脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖的影響，以分析O-GAG對(duì)病毒感染動(dòng)物免疫功能的作用。 結(jié)果：1、在體外實(shí)驗(yàn)中顯示，0-GAG在50-1600μg/m1濃度范圍內(nèi)對(duì)Vero細(xì)胞無(wú)明顯毒性。與病毒對(duì)照組相比，0-GAG各濃度(100μg/ml、50μg/m

4、l、25μg/ml)能保護(hù)HSV-Ⅰ感染的Vero細(xì)胞，使細(xì)胞增值活性增強(qiáng)，減弱HSV-Ⅰ導(dǎo)致的病變效應(yīng)，抑制病毒的復(fù)制(P<0.01)，但是0-GAG體外給藥對(duì)HSV-Ⅰ沒(méi)有直接殺傷作用(P>0.05)。 2、HSV-Ⅰ感染小鼠在注射不同劑量的0-GAG(10mg、20mg、40mg/kg)后，其體重增加，平均存活時(shí)間延長(zhǎng)，死亡率降低，與病毒組差異有顯著性意義(P<0.05)； O-GAG(10mg、20mg、40mg

5、/kg)對(duì)HSV-I感染小鼠的內(nèi)臟器官有一定的保護(hù)作用，能減輕組織的病理改變。 3、與病毒對(duì)照組相比，O-GAG(10mg、20mg、40mg/kg)均能顯著提高病毒感染小鼠的胸腺指數(shù)和脾指數(shù)(P<0.05，P<0.01)；與病毒組比較，O-GAG能夠增強(qiáng)病毒感染小鼠巨噬細(xì)胞的吞噬能力；促進(jìn)脾淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化增殖(P<0.05，P<0.01)。 結(jié)論：O-GAG在體外具有一定的抗單純皰疹病毒I型的作用，對(duì)HSV-I感染的小鼠有治療作