皮肌炎與四種人類皰疹病毒相關(guān)性的研究.pdf

1、目的:通過檢測皮肌炎(dermatomyositis,DM)患者外觀正常皮膚、肌肉及外周血中人類皰疹病毒1型(又稱單純皰疹病毒-1,herpes simplex virus 1,HSV1)、2型(單純皰疹病毒-2,HSV2)、4型(EB病毒,Eptein-Barr virus,EBV)、5型(人類巨細(xì)胞病毒,human cytomegalovirus,HCMV)的特異性DNA序列,探討皮肌炎與這四型人類皰疹病毒(human herpes

2、virus,HHV)之間的相關(guān)性.方法:一、實驗材料1、病例資料皮肌炎患者的32份外觀正常皮膚、29份肌肉及31份外周血標(biāo)本取自42例經(jīng)臨床、病理、肌電圖和血清肌酶檢查確診的病例,所有病例均來自中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院及沈陽市第七人民醫(yī)院皮膚科.2、對照資料(1)正常對照:正常皮膚36份、正常肌肉26份及健康獻(xiàn)血員外周血46份;(2)陽性對照:HSV1感染的細(xì)胞中提取的DNA作為HSV1的陽性對照;EBV和HHV8共感染的細(xì)胞系(BC-

3、1)中提取的DNA作為EBV的陽性對照.(3)陰性對照:在PCR反應(yīng)體系中以滅菌雙蒸水代替DNA模板進(jìn)行擴增反應(yīng).二、實驗方法1、DNA的提取采用酚-氯仿法提取皮膚、肌肉及外周血白細(xì)胞中DNA,并以紫外分光光度計測定濃度及純度后,于-20℃保存待用.2、PCR技術(shù)所提取的DNA均以內(nèi)對照引物PCO3/PCO4進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)擴增人β-球蛋白基因,產(chǎn)物片段長度110bp,陽性標(biāo)

4、本入選本實驗.用HSV1、HSV2、EBV、HCMV的通用引物P-1/P-2以PCR技術(shù)檢測上述病毒的DNA序列,目的片段長度分別為518bp、518bp、524bp和589bp.PCR反應(yīng)后,對其產(chǎn)物進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳,并可直接將擴增為589bp的HCMV分辯開來.3、限制性核酸內(nèi)切酶酶切鑒定以通用引物P-1/P-2擴增的產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳鑒定為陽性片段者(520bp左右)利用DNA片段回收試劑盒回收,再以限制性內(nèi)切酶BamHⅠ和S

5、maⅠ對回收片段進(jìn)行酶切反應(yīng),其產(chǎn)物以8﹪聚丙烯酰胺凝膠電泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)鑒定,從而區(qū)分HSV1、HSV2及EBV.結(jié)論1、部分皮肌炎患者外觀正常皮膚(5-32)、肌肉組織(6/29)以及外周血(4/31)檢測出EBVDNA片段,與正常對照的皮膚、肌肉以及外周血的EBV檢出率相比,差異有顯著性,提示EBV可能與皮膚炎有一定的相關(guān)性.2、部分皮肌炎患者外周血(1/31)檢