膿素癥ARDS病程不同時期肺泡巨噬細胞源性蛋白質(zhì)組學的變化及其臨床意義.pdf

1、第一部分膿毒癥ARDS患者病程不同時期肺泡巨噬細胞蛋白質(zhì)組學的變化
　　背景與目的：急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distresssyndrome，ARDS)是一種肺內(nèi)過度性、失控性的炎癥反應(yīng)，多種炎癥細胞和炎癥介質(zhì)是ARDS發(fā)生發(fā)展的關(guān)鍵因素。肺泡巨噬細胞(alveolar macrophage，AM)是機體重要的炎性細胞，通過研究在ARDS病程不同時期中AM蛋白質(zhì)表達的變化，可能為闡明ARDS發(fā)病機理

2、提供新的線索和思路。
　　方法：以14個繼發(fā)于膿毒血癥的ARDS患者為研究對象，分別于并發(fā)中度ARDS后病程的第一天（第一組）及病情明顯好轉(zhuǎn)的第五天（第二組）取支氣管肺泡灌洗液，從中提取肺泡巨噬細胞，應(yīng)用雙向凝膠電泳(Two dimensional electrophoresis，2DE)和基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(Matrix-Assisted Laser Desorption/IonizationTime of Fli

3、ght Mass Spectrometry, MALDI-TOF-MS)技術(shù)篩選鑒定出差異蛋白質(zhì)。
　　結(jié)果：兩組AM共發(fā)現(xiàn)135個顯著不同的點，其中87個點容積的變化＞2.5倍，48個點顯示＜2.5倍的變化。進一步通過串聯(lián)質(zhì)譜確定差異蛋白質(zhì)的身份。最終有35個蛋白質(zhì)得以確認。與第一組相比較，第二組中表達上調(diào)的蛋白質(zhì)點有21個，表達下調(diào)的蛋白質(zhì)點有14個。
　　結(jié)論：膿毒癥ARDS患者病程不同時期肺泡巨噬細胞蛋白質(zhì)存在差異性

4、表達。
　　第二部分膿毒癥ARDS患者病程不同時期肺泡巨噬細胞源性HSP27及S100A9、TNF-a、IL-1ra表達的差異
　　背景：本研究的第一部分選擇了繼發(fā)于膿毒血癥的ARDS患者，在病程不同時期取肺泡巨噬細胞進行蛋白質(zhì)組學分析，研究肺泡巨噬細胞的蛋白質(zhì)組學的動態(tài)變化，通過串聯(lián)質(zhì)譜最終有35個蛋白質(zhì)得以確認，其中表達上調(diào)的蛋白質(zhì)點有21個，表達下調(diào)的蛋白質(zhì)點有14個。本部分研究選擇表達下調(diào)的蛋白質(zhì)之一熱休克蛋白27(

5、heatshock protein27，HSP27)以及表達上調(diào)的蛋白質(zhì)S100A9、腫瘤壞死因子-a(Tumor Necrosis Factor-a，TNF-a)、白細胞介素-1受體拮抗劑(Interleukin-1 receptor antagonist，IL-1ra)行Western Blot實驗對第一部分結(jié)果進行驗證。
　　目的：探討膿毒癥ARDS患者在病程的不同時期HSP27及S100A9、TNF-a、IL-1ra在肺泡

6、巨噬細胞是否有表達及表達是否有差異。
　　方法：以5個膿毒癥ARDS患者為研究對象，分別于ARDS發(fā)病的第一天及第五天行支氣管肺泡灌洗，從中提取肺泡巨噬細胞，采用Western Blot檢測ARDS病程不同時期肺泡巨噬細胞HSP27及S100A9、TNF-a、IL-1ra的差異表達。
　　結(jié)果：TNF-α、IL-1ra、S100A9及HSP27在ARDS患者的肺泡巨噬細胞中均有表達，表達率100％。TNF-α、IL-1ra、

7、S100A9在第二組(ARDS病程第5天)比第一組（ARDS病程第1天）表達明顯增強:TNF-α表達相對值分別是day1（0.41±0.03），day5（0.74±0.07）P＜0.05;IL-1ra: day1(0.26±0.04), day5(0.54±0.06)P＜0.05;S100A9表達相對值分別是:day1（0.29±0.02），day5（0.48±0.03）P＜0.05。而HSP27在第二組（ARDS病程第5天）比第一組（

8、ARDS病程第1天）表達明顯減弱，表達相對值分別是day1（0.60±0.04），day5(0.35±0.02)，P＜0.05。兩組間TNF-α、IL-1ra、S100A9及HSP27表達的差異與經(jīng)過2-DE分析后的蛋白質(zhì)組學結(jié)果一致。
　　結(jié)論：膿毒癥ARDS患者在病程的不同時期HSP27及TNF-α、IL-1ra、S100A9在肺泡巨噬細胞均有差異性表達，且與蛋白質(zhì)組學結(jié)果一致。
　　第三部分毒癥ARDS患者血漿及支氣管

9、肺泡灌洗液中TNF-a、IL-1、IL-Ⅰra、IL-10、vWF及RAGE的水平及對ARDS病情發(fā)展及預(yù)后的評估
　　背景：ARDS是以突出的肺部損傷、炎癥及微血管通透性增加為特征進而導致彌漫性肺水腫和機械性功能障礙，最終導致呼吸衰竭的一種疾患。ARDS患者的主要死因是由于肺損傷引起的系統(tǒng)性炎癥所導致的多器官功能衰竭。在本研究的第一部分獲得了在ARDS病程不同時期肺泡巨噬細胞差異性表達的蛋白質(zhì)。在本研究的第二部分，用Wester

10、n Blot的研究方法證實ARDS患者在病程的不同時期TNF-a及IL-1ra在肺泡巨噬細胞有差異性表達，且與蛋白質(zhì)組學結(jié)果一致。因此在第一、第二部分研究的基礎(chǔ)上，本部分研究選擇在ARDS患者血漿及肺泡灌洗液中檢測TNF-a、IL-1ra及其他炎癥介質(zhì)研究其對ARDS病情發(fā)展及預(yù)后的預(yù)測價值。
　　目的：探討ARDS患者血漿及支氣管肺泡灌洗液(BALF)中TNF-a、IL-1、IL-1ra、IL-10、晚期糖基化終末產(chǎn)物受體(re

11、ceptor foradvanced glycation end products,RAGE)、von Villebrand因子(vWF)對ARDS病情發(fā)展及預(yù)后的預(yù)測作用。
　　方法：研究對象選擇膿毒癥ARDS患者54例，所有研究對象收住ICU時均處于病情的急性期，并發(fā)ARDS24小時以內(nèi)，在收住ICU病房的第1天6小時內(nèi)立即收集外周血液標本和肺泡灌洗液(BALF)標本。用酶聯(lián)免疫吸附試驗測定細胞因子TNF-a、IL-1、IL-

12、1ra、IL-10、vWF及RAGE的濃度以研究這些參數(shù)對ARDS發(fā)展及預(yù)后的預(yù)測作用。研究對象分為三組:A組(n=20)為中度ARDS患者組;B組(n=17)為輕度ARDS患者組，該組患者在48小時內(nèi)發(fā)展為中度ARDS;C組(n=17)為輕度ARDS患者組，該組患者未發(fā)展為中度ARDS。
　　結(jié)果：輕度ARDS患者血漿及灌洗液中TNF-a、IL-1、及RAGE、vWF均是病情進展惡化很好的陰性預(yù)測值，其中血漿中以上各指標的陰性預(yù)