膿毒癥大鼠血小板蛋白質(zhì)組學(xué)的研究.pdf

1、第一部分：膿毒癥大鼠血小板活化的研究 物p一血農(nóng)毒癥大鼠血小板計數(shù)和血小板活化標記物p一血小板球蛋白(p-TG)、血小板主狀態(tài)F4)血清濃度，探討膿毒癥大鼠血小板活性狀態(tài)的變化及其意義。L穿孑時象分為假手術(shù)術(shù)后6h、24h組和盲腸結(jié)扎穿孔(CLP)術(shù)后6h、24h組，手術(shù)丑盲腸結(jié)扎穿孔法制作膿毒癥大鼠模型，假手術(shù)組不行盲腸結(jié)扎穿孔。大鼠躉4，j留取血液標本行血氣、肝腎功能等常規(guī)檢測，并檢測血小板計數(shù)及采用酶缸小付(ELISA)方

2、法檢測血清B一血小板球蛋白、血小板第4因子濃度；并留取肺. 術(shù)后6h及24h組，假手術(shù)組與CLP組之間的差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)。氣，肝。腎功能及肺肝腎病理結(jié)果表明本研究中的CLP模型較好地模擬了膿辜癥大鼠血小板計數(shù)較正常大鼠下降，尤其在CLP術(shù)后24h組下降更為明走大鼠血小板活化標志物p-’FG和PF4濃度較正常大鼠升高，尤其在CLP且升高更為明顯；提示膿毒癥大鼠存在血小板活化現(xiàn)象，且膿毒癥病情越重七程度越明顯。

3、 第二部分：膿毒癥大鼠血小板蛋白質(zhì)組學(xué)的研究 [目的] 觀察膿毒癥大鼠血小板蛋白質(zhì)組的變化，從血小板整體蛋白質(zhì)水平探討膿毒癥的病理生理機制，為臨床診治膿毒癥提供理論依據(jù)。 [方法] 實驗分2組：假手術(shù)組及CLP術(shù)后24h組，每組6只大鼠。然后分別于手術(shù)后24h經(jīng)頸動脈插管取血。分離血小板，應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)提取血小板總蛋白，利用固相pH梯度及SDS-PAGE二維凝膠電泳分離血小板總蛋白，考馬斯亮藍染

4、色、imagescanner掃描、PDQuest軟件圖像分析找出差異表達蛋白質(zhì)點，應(yīng)用基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時間質(zhì)譜分析(MALDI-TOF-MS)及Mascot查詢軟件、NCBI、MSDB數(shù)據(jù)庫鑒定差異表達蛋白。對質(zhì)譜鑒定出的差異表達蛋白質(zhì)FGG進行免疫印跡(Western blot)方法分析，驗證FGG在兩組大鼠血小板中的表達情況。 [結(jié)果] 1每組6張膠上表達的蛋白質(zhì)點數(shù)分別為2094±355，1769±229個

5、；平均匹配率分別為93％、91％；等電聚焦(IEF)方向位置偏差分別為(0.79±0.24)mm．、(0.71±0.40)mm；SDS-PAGE方向位置偏差分別為(1.0±0.31)mm、(1.1±0.42)mm。 2篩選出差異表達蛋白質(zhì)點20個，進行質(zhì)譜分析質(zhì)譜峰信噪比均高，經(jīng)查詢蛋白質(zhì)序列數(shù)據(jù)庫鑒定了7個蛋白質(zhì)點，對應(yīng)8種蛋白質(zhì)，分別為肌球蛋白輕鏈、琥珀酸脫氫酶復(fù)合體亞基B、ATP合酶β亞基、絲氨酸蛋白酶抑制劑、纖維蛋白原γ

6、鏈、α1-抗胰蛋白酶前體、蛋白質(zhì)二硫化物異構(gòu)酶A3。 3圖像分析發(fā)現(xiàn)在鑒定出的蛋白質(zhì)中，對照組與膿毒癥組比較除蛋白質(zhì)二硫化物異構(gòu)酶A3和肌球蛋白輕鏈表達下調(diào)外，其余幾種蛋白均上調(diào)。 4 Western blot方法驗證膿毒癥后血小板FGG的表達結(jié)果顯示，CLP術(shù)后血小板FGG表達升高，與2-DE結(jié)果一致。 [結(jié)論] 1本研究建立了圖像清晰、分辨率高、重復(fù)性好的膿毒癥大鼠血小板蛋白質(zhì)固相pH梯度2-DE圖譜