2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、阿爾茨海默?。ˋlzheimer’s disease,AD)是一種發(fā)病率較高、危害性較大的神經(jīng)系統(tǒng)退行性疾病,其主要臨床特征為進行性認知和記憶功能減退。β-淀粉樣蛋白(β-Amyloid protein,Aβ)在腦內(nèi)的生成和沉積所形成的老年斑(senile plaque, SP)在AD的病理過程中起重要的作用。Aβ生成增加、酶介導的Aβ降解不足以及Aβ從腦內(nèi)清除減少是導致Aβ聚集的重要原因。過量的Aβ聚集后形成淀粉樣沉積和老年斑,從而產(chǎn)

2、生神經(jīng)毒性,出現(xiàn)認知及記憶功能損害。
  三磷酸腺苷結合盒轉運體A1(ATP binding cassette transporter A1,ABCA1)與Aβ代謝聯(lián)系緊密。ABCA1蛋白缺失會導致腦內(nèi)載脂蛋白E(apolipoprotein E, apoE)荷脂減少和Aβ水平增加。ABCA1蛋白過表達會增加腦內(nèi)apoE荷脂和減少Aβ水平,進而對AD產(chǎn)生影響。ABCA1高表達時,Aβ生成減少,降解和清除增加。鑒于ABCA1在Aβ的

3、代謝和集聚中起非常重要作用,可以將ABCA1作為治療AD的一個重要靶點。因此,尋找一種能有效增加ABCA1表達的物質(zhì)變得至關重要。
  Apelin是脂肪細胞分泌的一種具有生物活性的肽類激素,在體內(nèi)具有廣泛的組織學分布。近來研究表明,Apelin在海馬神經(jīng)元保護過程中起重要的作用?;诤qR神經(jīng)元在學習與記憶中具有重要的地位,提示apelin對學習記憶具有調(diào)節(jié)作用。我們前期研究表明,Apelin-13增加THP-1源性巨噬細胞ABC

4、A1水平,但其對Aβ代謝的作用目前尚不清楚。鑒于ABCA1蛋白與Aβ代謝之間的密切關系,我們提出以下假設:apelin-13通過增加ABCA1蛋白水平減少Aβ沉積及改善AD模型鼠認知與記憶功能。
  本課題分三個部分來驗證假設,第一部分使用apelin-13處理大鼠嗜鉻細胞瘤細胞株(PC-12細胞,具有神經(jīng)內(nèi)分泌細胞特性),觀察apelin-13是否通過影響ABCA1蛋白水平從而調(diào)節(jié)PC-12細胞Aβ代謝,并闡明其機制。第二部分使

5、用apelin-13處理APP/PS1轉基因小鼠,觀察apelin-13是否改善AD模型鼠的認知記憶功能及減少其Aβ沉積。第三部分使用ABCA1 SiRNA沉默APP/PS1轉基因小鼠腦組織ABCA1表達,觀察apelin-13是否通過ABCA1蛋白改善AD模型鼠的認知記憶功能及減少其Aβ沉積。本研究對AD的防治提供了一個新的實驗依據(jù)。
  第一部分,Apelin-13增加PC-12細胞ABCA1蛋白水平調(diào)節(jié)Aβ代謝
  目

6、的:觀察apelin-13是否通過影響ABCA1蛋白水平從而調(diào)節(jié)Aβ代謝,并闡明其機制。
  方法:①Western blot檢測PC-12細胞血管緊張素受體AT1相關的受體蛋白(putative recep tor p rotein related to the angiotensin recep tor AT1,APJ)表達,以確定PC-12細胞存在apelin-13作用受體。②用不同濃度(1、10、100nmol/L)的ap

7、elin-13處理PC-12細胞24h及用100nmol/L apelin-13處理細胞24不同時間(12h、24h、48h)后,酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測Aβ1-40及Aβ1-42水平,Western blot免疫印跡法檢測APP、BACE1及NEP蛋白水平,根據(jù)試劑盒方法檢測BACE1及NEP酶活性, RT-PCR檢測ABCA1 mRNA水平,Western Blot檢測ABCA1蛋白水平,液體閃爍計數(shù)法檢測細胞內(nèi)膽固醇的流出

8、。③先使用ABCA1 SiRNA抑制PC-12細胞ABCA1蛋白表達,再使用100nmol/L apelin-13處理PC-12細胞24h,ELISA檢測Aβ1-40及Aβ1-42水平,根據(jù)試劑盒方法檢測BACE1及NEP酶活性。以確定ABCA1在apelin-13對PC-12細胞Aβ代謝影響中所起的作用。④先使用PKCαSiRNA抑制PKCα表達,再使用100nmol/L apelin處理PC-12細胞24h,檢測apelin對ABC

9、A1蛋白水平的影響。使用不同濃度(1、10、100nmol/L)的apelin-13處理PC-12細胞24h,檢測鈣調(diào)蛋白(calpain)活性。⑤使用不同濃度(1、10、100nmol/L)apelin-13處理PC-12細胞24h,Western blot方法檢測apoE蛋白表達水平。使用apoE SiRNA抑制apoE表達,100nmol/L apelin處理PC-12細胞24h,檢測apelin對BACE1及NEP酶活性的影響。

10、
  結果:①PC-12細胞存在APJ表達。②Apelin-13顯著降低PC-12細胞Aβ1-40 及Aβ1-42水平,對APP、BACE1及NEP蛋白表達無顯著影響,降低BACE1酶活性,增加NEP酶活性,對ABCA1 mRNA水平無影響,增加ABCA1蛋白水平,促進膽固醇流出,減少細胞內(nèi)脂質(zhì)蓄積。③使用ABCA1 SiRNA抑制PC-12細胞ABCA1蛋白表達后,apelin-13降低PC-12細胞Aβ1-40及Aβ

11、1-42水平的作用顯著減弱,其降低 BACE1酶活性及增加 NEP酶活性的作用顯著抑制。④使用 PKCα SiRNA抑制PC-12細胞PKCα表達后,apelin增加ABCA1蛋白水平的作用減弱;Apelin-13顯著抑制PC-12細胞calpain活性。⑤Apelin-13對PC-12細胞apoE蛋白表達無顯著影響;使用apoE SiRNA抑制PC-12細胞apoE表達后,apelin-13降低BACE1酶活性及增加NEP酶活性的作用

12、顯著減弱。
  結論:
 ?、貯pelin-13通過PKCα途徑增加PC-12細胞ABCA1蛋白水平;
  ②Apelin-13通過增加PC-12細胞ABCA1蛋白水平,降低BACE1活性減少Aβ生成、增強NEP活性增加Aβ降解,從而減少Aβ水平。
  第二部分,Apelin-13改善APP/PS1小鼠認知與記憶功能
  目的:觀察apelin-13是否影響APP/PS1小鼠認知與記憶功能及腦組織Aβ代謝。

13、
  方法:用不同劑量(1、2、4μg)的apelin-13側腦室注射處理APP/PS1小鼠30天(1次/天)后,Y迷宮實驗、新物體識別實驗及Morris水迷宮實驗檢測小鼠認知與記憶功能。隨后處死小鼠,ELISA檢測小鼠海馬和前額葉組織的Aβ1-40及Aβ1-42水平,剛果紅染色檢測海馬組織Aβ沉積情況,Western blot檢測海馬和前額葉組織APP、BACE1及NEP蛋白水平,根據(jù)試劑盒方法檢測海馬和前額葉組織BACE1及N

14、EP酶活性,ELISA檢測小鼠外周血Aβ1-40及Aβ1-42水平,Western blot檢測海馬和前額葉組織ABCA1蛋白水平。
  結果:Apelin-13顯著提高APP/PS1小鼠在Y迷宮實驗中的正確率,顯著增加APP/PS1小鼠在新物體識別實驗中(無論是短時檢測還是長時檢測)對新物體的認知能力,并且顯著減少APP/PS1小鼠在Morris水迷宮實驗中的平均游泳距離及平均潛伏期。Apelin-13顯著降低 APP/PS1小

15、鼠海馬和前額葉組織的Aβ1-40及 Aβ1-42水平,對APP、BACE1及NEP蛋白水平無顯著影響,減少海馬和前額葉組織BACE1酶活性,增加NEP酶活性,顯著增加外周血Aβ1-40及Aβ1-42水平,顯著提高海馬和前額葉組織ABCA1蛋白水平。
  結論:
 ?、貯pelin-13改善APP/PS1小鼠的認知與記憶功能;
  ②Apelin-13減少APP/PS1小鼠海馬和前額葉組織Aβ生成,增加Aβ降解及清除。<

16、br>  ③Apelin-13增加APP/PS1小鼠海馬和前額葉組織ABCA1蛋白水平。
  第三部分 Apelin-13通過ABCA1改善APP/PS1小鼠的認知與記憶能力
  目的:觀察apelin-13是否通過ABCA1蛋白影響APP/PS1小鼠認知與記憶功能及腦組織Aβ代謝。
  方法:使用ABCA1 SiRNA側腦室注射沉默APP/PS1小鼠腦組織ABCA1蛋白表達,觀察apelin-13對AD模型小鼠認知與

17、記憶功能及腦組織Aβ代謝的影響。Y迷宮實驗、新物體識別實驗及Morris水迷宮實驗檢測小鼠認知與記憶功能。處死小鼠,ELISA檢測小鼠海馬和前額葉組織的Aβ1-40及Aβ1-42水平,剛果紅染色檢測海馬組織Aβ沉積情況,試劑盒檢測海馬和前額葉組織BACE1及NEP酶活性,ELISA檢測小鼠外周血Aβ1-40及Aβ1-42水平。
  結果:當腦組織ABCA1表達被沉默后,Apelin-13對APP/PS1小鼠認知記憶功能及腦組織Aβ

18、沉積的改善作用減弱,Apelin-13對APP/PS1小鼠海馬和前額葉組織 BACE1活性的抑制作用及對NEP活性的促進作用降低,Apelin-13增加外周血Aβ1-40及Aβ1-42水平的效應下降。
  結論:
  ①Apelin-13通過增加ABCA1蛋白水平改善APP/PS1小鼠的認知與記憶功能;
 ?、贏pelin-13通過增加ABCA1蛋白水平減少APP/PS1小鼠海馬和前額葉組織Aβ生成,增加Aβ降解及清除

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