肝細(xì)胞色素P4501A1、2E1、3A1在大鼠NAFL形成中的作用.pdf

1、目的：研究大鼠肝細(xì)胞色素P4501A1、2E1、3A1在大鼠NAFL形成中的作用，探討大鼠NAFL的發(fā)生機(jī)制，為早期臨床防治NAFL摸索理論基礎(chǔ)。 方法：64只雄性Wister大鼠隨機(jī)分為基礎(chǔ)飼料組(C)、高脂飼料組(F)，其中C、F組各含2周、4周、8周和12周4個(gè)時(shí)相點(diǎn)，每組8只動(dòng)物。動(dòng)態(tài)觀察各組：①動(dòng)物體重、肝濕重變化；②HE染色光鏡觀察肝臟組織病理變化，電鏡觀察肝組織超微結(jié)構(gòu)；③測(cè)定肝臟組織甘油三酯(TG)、丙二醛(MD

2、A)、以及血清中TG、游離脂肪酸(FFA)生化指標(biāo)的含量變化；④酶學(xué)測(cè)定大鼠肝臟組織CYP4501A1(7-乙氧基異惡唑0-脫乙基酶，EROD)活性；CYP4502E1(苯胺羥化酶，ANH)活性；CYP4503A1(紅霉素N-脫甲基酶，ERD)活性。⑤免疫組化觀察CYP4501A1、2E1、3A1在肝組織中的分布；⑥RT-PCR和Westernblotting分析大鼠肝臟CYP4501A1、2E1、3A1mRNA和蛋白水平。 結(jié)

3、果：1、大鼠體重、肝濕重的變化情況：12周F組體重及肝臟濕重明顯高于C組(P＜0.01)；2、HE染色結(jié)果顯示F組肝臟在2周即可見(jiàn)脂肪浸潤(rùn)，4周時(shí)出現(xiàn)輕度脂肪肝，8-12周出現(xiàn)中、重度脂肪肝；電鏡下觀察F組12周肝組織顯示：肝細(xì)胞胞漿內(nèi)大量類圓形脂滴沉積，細(xì)胞器及胞核被擠至胞漿的一邊，胞漿疏松、水腫；而對(duì)照組結(jié)構(gòu)正常；3、肝臟內(nèi)TG、MDA含量F組2周后明顯高于C組(P＜0.05)，隨時(shí)間延長(zhǎng)，其含量逐漸增加，以12周時(shí)最為顯著(P＜0

4、.01)；血清中FFA、TG變化與肝組織TG、MDA也有類似變化；4、大鼠肝臟組織CYP4501A1(7-乙氧基異惡唑O-脫乙基酶，ETOD)活性、CYP4502E1(苯胺羥化酶，ANH)活性及CYP4503A1(紅霉素N-脫甲基酶，ERD)的活性F組于2周后明顯增強(qiáng)(P＜0.05)，隨時(shí)間延長(zhǎng)，酶活性以12周時(shí)增加最為顯著(P＜0.01)；5、免疫組織化學(xué)染色顯示：CYP4501A1在C組肝細(xì)胞胞漿內(nèi)著色，呈黃色細(xì)顆粒，散在分布，F(xiàn)組

5、2周，著色較正常加深，F(xiàn)組8、12周著色逐漸加深，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增加，在脂肪變明顯的部位著色深；CYP4502E1、3A1與CYP4501A1染色結(jié)果變化趨勢(shì)相似；6、Westernblot檢測(cè)結(jié)果顯示：F組CYP4501A1蛋白的表達(dá)，2周后與C組比較即有增加，有顯著性差異(P＜0.05)，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，12周時(shí)增加最為明顯(P＜0.01)；CYP4502E1、3A1蛋白的表達(dá)與CYP4501A1結(jié)果變化規(guī)律相似；7、RT-PCR檢測(cè)肝臟

6、CYP4501A1、2E1、3A1mRNA水平顯示：F組CYP4501A1mRNA的水平在2周與C組比較即顯著升高(P＜0.05)，隨著時(shí)間延長(zhǎng)，在12周顯著高于正常水平(P＜0.01)；CYP4502E1、3A1mRNA的水平與CYP4501A1mRNA的水平變化規(guī)律相似。 結(jié)論：非酒精性脂肪肝大鼠，隨著脂肪肝的發(fā)生和程度加重，CYP4501A1、2E1、3A1表達(dá)逐漸增強(qiáng)，其介導(dǎo)的酶活性顯著增高，通過(guò)影響脂肪酸代謝，啟動(dòng)脂質(zhì)