小鼠肥大細(xì)胞應(yīng)答布魯菌感染的分子機(jī)制及效應(yīng)研究.pdf

1、分類號(hào)：S曼51：2密級(jí)：公玨學(xué)2011430小鼠肥大細(xì)胞應(yīng)答布魯菌感染的分子機(jī)制及效應(yīng)研究StudyoftheMolecularMechanismandeffectofMastCellResponseinMiceBrucellaInfection學(xué)位申請(qǐng)人：谷玉靜指導(dǎo)教師：郝滿良副教授學(xué)科專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)學(xué)位類別：農(nóng)學(xué)碩士授予單位：河北農(nóng)業(yè)大學(xué)答辯日期：二。一四年五月二十九日摘要||IIIIIIIIIIIIIIlllIIIIIIIII

2、IIIfY2668395本試驗(yàn)旨在研究小鼠肥大細(xì)胞應(yīng)答布魯菌感染的分子機(jī)制及效應(yīng)。本文采用體內(nèi)和體外相結(jié)合的試驗(yàn)方法，研究布魯菌感染所引起的MC的變化，TLRsmRNA表達(dá)的變化，血清中各種細(xì)胞因子表達(dá)的變化，以及對(duì)DCs分布的影響。體外試驗(yàn)使用P815株MC在培養(yǎng)板上進(jìn)行培養(yǎng)，將處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的布魯菌s2株，S2WboA乒株分別按感染復(fù)數(shù)(MOI)1：100分別感染MC，并設(shè)正常對(duì)照組(只加培養(yǎng)液)，于感染12h、24h收集細(xì)胞，RT

3、PCR檢測(cè)TLR2、TLR4、TLR8、TLR9的表達(dá)。RTPCR結(jié)果顯示，布魯菌感染MC后在mRNA水平引起了TLRs的變化，高于正常組，感染布魯菌S2株組的TLRs的表達(dá)基本上都高于感染布魯菌S2WboA斗株組，尤其是TLR4的表達(dá)，這可能與布魯菌S2WboA^株不產(chǎn)生LPS有關(guān)。這種變化提高了細(xì)胞的抗原提呈功能，并促進(jìn)各種細(xì)胞因子的分泌，從而增強(qiáng)機(jī)體抵抗布魯茵感染的能力。體內(nèi)試驗(yàn)將150只8周齡雌性BALB／c小鼠隨機(jī)分為5組，每

4、組30只。A組為PBS對(duì)照組；B組為布魯茵s2株感染組；c組為布魯菌s2WboA斗株感染組；D組為清除MC后感染布魯菌S2株組；E組為清除MC后感染布魯菌s2、帕oA乒株組。分別在接種后lh，6h，12h，24h，48h，72h采取外周血液，分離血清，ELISA檢測(cè)血清中的TNF—a、IFN—Y、IL一4的含量；頸椎脫臼法處死小鼠，收集陰道、髂內(nèi)淋巴結(jié)、子宮，制作石蠟切片，甲苯胺藍(lán)染色觀察MC的變化；免疫組化觀察DCs在陰道粘膜的分布。

5、ELISA結(jié)果顯示，布魯菌感染增加了血清中的TNF—Q、IFN—Y、IL一4的表達(dá)，引起了顯著的炎癥反應(yīng)，提示可能啟動(dòng)了以Thl免疫為主，Th2免疫為輔的免疫反應(yīng)來(lái)抵抗感染；切片顯示MC數(shù)量沒(méi)有明顯增加，沒(méi)有顯示出一定的規(guī)律性，可能與個(gè)體差異有關(guān)；免疫組化顯示DCs在感染6h、12h顯著增多，提示可能是布魯菌刺激DCs向淋巴結(jié)發(fā)生遷移，成熟并激活初始T細(xì)胞，啟動(dòng)T111免疫。結(jié)論：抗c1(it抗體成功清除了小鼠陰道、子宮、淋巴結(jié)的MC；

6、MC通過(guò)調(diào)節(jié)TLRs的表達(dá)，應(yīng)答布魯菌的感染，同時(shí)，明確了LPS在MC識(shí)別布魯菌過(guò)程中的作用；MC通過(guò)分泌并調(diào)節(jié)不同的細(xì)胞因子，如TNFa、TFN—y、IL一4等，啟動(dòng)Thl／Th2免疫，以Thl免疫為主，Th2免疫為輔，共同參與布魯菌感染的免疫應(yīng)答；清除MC后，機(jī)體通過(guò)其他途徑或機(jī)制抵抗布魯菌的感染；DCs是布魯菌的抗原提呈細(xì)胞，MC通過(guò)TNFQ等活性物質(zhì)的釋放調(diào)節(jié)DCs的抗原提呈功能；布魯菌S2株與布魯菌S2WboA壬相比，雖然毒性