MIP1-a增加腸屏障通透性的研究.pdf

1、中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學(xué)位論文是我本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過(guò)的材料，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。申請(qǐng)學(xué)位論文與資料若有不實(shí)之處，本人承擔(dān)一切相關(guān)責(zé)任。1嗚論文作者簽名：么!羔=日期：3z厶=三：

2、f2中國(guó)醫(yī)科大學(xué)研究生學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本人完全了解中國(guó)醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保護(hù)知識(shí)產(chǎn)權(quán)的規(guī)定，即：研究生在攻讀學(xué)位期間論文工作的知識(shí)產(chǎn)權(quán)單位屬中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時(shí)署名單位為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)，且導(dǎo)師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國(guó)醫(yī)科大學(xué)。學(xué)校有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學(xué)?？梢怨紝W(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保

3、存論文。論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：蕓乒多、互互匹中文論著摘要MIPlQ增加腸屏障通透性的研究目的探討MIPlc‘對(duì)腸上皮細(xì)胞屏障的通透性及緊密連接蛋白分布及表達(dá)的影響材料與方法1、腸屏障體外模型的建立：應(yīng)用人大腸腺癌細(xì)胞株(Caco2細(xì)胞)為陳譽(yù)華教授惠贈(zèng)。將lXl05加到孔徑為04微米的Transwell(Costar)24孔板上，定時(shí)換液，培養(yǎng)4天后細(xì)胞達(dá)到融合狀態(tài)，形成具有緊密連接的上皮細(xì)胞單層。2、單層細(xì)胞通透性分析：在

4、Transwcll上室中加入濃度為50ng／mlMIPla，分別孵育0、1、4、8、16h；加入不同濃度的MIPla(O、5、10、50ng／m1)孵育8h，觀察加入MIP1a前后MIP1a對(duì)Caco2細(xì)胞辣根過(guò)氧化物酶透過(guò)率的影響。3、用免疫熒光法觀察MIPl0【與Caco2細(xì)胞相互作用后腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Zo1和Occudin的變化。31在蓋玻片上接種Caco一2細(xì)胞，培養(yǎng)至完全融合時(shí)加入MIPl僅，37℃孵育0、2、4、8、1

5、6、24小時(shí)，用免疫熒光染色檢測(cè)ZO1的變化。32在蓋玻片上接種Caco2細(xì)胞，培養(yǎng)至完全融合時(shí)加入MIPl0【，37。C孵育0、2、4、8、16、24小時(shí)，用免疫熒光染色檢測(cè)Occudin的變化。結(jié)果1、MIP—la增加腸上皮細(xì)胞屏障的通透性與對(duì)照組相比，在MIP1a作用8小時(shí)后，過(guò)氧化物酶的通透性開始升高，16小時(shí)這種作用達(dá)到最強(qiáng)。2、MIP1a引起腸上皮細(xì)胞緊密連接蛋白Zo1和occludin的定位異常。正常Caco2細(xì)胞，occ