煙草馬鈴薯Y病毒病抗性遺傳及分子標(biāo)記.pdf

1、煙草是我國重要的經(jīng)濟(jì)作物之一。煙草馬鈴薯Y病毒(PVY)已成為我國煙葉生產(chǎn)的主要病害，發(fā)病煙株大幅減產(chǎn)，甚至絕收，感病煙葉采收烘烤之后其色澤、香吃味均較差，品質(zhì)大為降低。培育抗病品種被認(rèn)為是最經(jīng)濟(jì)有效的控制方法。但利用常規(guī)育種途徑培育抗病品種年限長，效率低。分子標(biāo)記輔助育種可以縮短育種進(jìn)程，避免繁冗的接種鑒定過程，節(jié)省人力物力，提高育種效率。本文主要研究?jī)?nèi)容包括三方面：(1)配制抗感組合VAM×中煙100和VAM×G140，苗期人工接種

2、鑒定F1和F2代，確定煙草馬鈴薯Y病毒N株系(PVYN)抗性遺傳規(guī)律；(2)構(gòu)建優(yōu)化了適合于煙草的SRAP反應(yīng)體系；(3)利用分離群體分析法(BSA)對(duì)煙草PVYN抗性基因進(jìn)行SRAP標(biāo)記篩選，確定與抗性基因緊密連鎖的SRAP分子標(biāo)記。主要結(jié)論如下： (1)在隔離條件下進(jìn)行苗期人工接種PVYN，調(diào)查結(jié)果顯示，白肋煙品種VAM高抗PVYN。VAM與感病品種中煙100和G140雜交后，其雜種F1均感PVYN，說明煙草品種VAM對(duì)PV

3、YN的抗性表現(xiàn)為隱性遺傳。F2代的抗感比例分離比均為7∶9，χ2檢驗(yàn)表明VAM對(duì)PVYN的抗性是由兩對(duì)隱性基因控制的，并存在互補(bǔ)作用，即只要存在一對(duì)隱性基因就表現(xiàn)抗性。 (2)利用正交設(shè)計(jì)L16(45)對(duì)煙草SRAP-PCR反應(yīng)體系的五因素(Tap酶，Mg2+，模板DNA，dNTP，引物)在四個(gè)水平上進(jìn)行優(yōu)化試驗(yàn)，得出如下結(jié)論：①各因素的不同水平對(duì)PCR反應(yīng)結(jié)果都有顯著的影響，其中Tap酶量影響最大；②篩選出各反應(yīng)因素的最佳水平

4、，建立煙草SRAP-PCR反應(yīng)的最佳體系(25ul)為：Tap酶1.0U，Mg2+1.5mmol/L，模板DNA30.00～120.00ng，dNTP0.1mmol/L，引物0.40umol/L。最后，應(yīng)用煙草SRAP-PCR最佳反應(yīng)體系對(duì)PCR擴(kuò)增程序中的退火溫度及循環(huán)次數(shù)進(jìn)行了篩選，得出SRAP-PCR擴(kuò)增以52℃退火溫度、35個(gè)循環(huán)次數(shù)為最佳。這一優(yōu)化系統(tǒng)的建立為今后利用SRAP標(biāo)記技術(shù)對(duì)煙草進(jìn)行基礎(chǔ)研究提供了一個(gè)實(shí)用性的程序。