以候選基因策略篩選馬鈴薯晚疫病水平抗性分子標(biāo)記.pdf

1、馬鈴薯是世界上第四大糧食作物，在我國和世界工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中均占有重要地位。馬鈴薯的生產(chǎn)受到多種病蟲害的制約，其中晚疫病影響最大。馬鈴薯晚疫病垂直抗性并不持久，因?yàn)樾庐a(chǎn)生的Phytophthora infestans小種會(huì)迅速克服這種單基因抗性。而多基因控制的水平抗性屬非小種特異性，具晚疫病水平抗性的馬鈴薯品種的抗性廣譜、持久，選育水平抗性品種是當(dāng)前馬鈴薯品種改良的重要目標(biāo)之一。控制水平抗性的許多微效基因與病原和環(huán)境的復(fù)雜互作，以及馬鈴薯栽培

2、種的四體性遺傳使得選擇十分困難。 本研究采用候選基因策略，在引自國際馬鈴薯中心的馬鈴薯晚疫病水平抗性材料B群體中篩選與晚疫病水平抗性顯著相關(guān)的分子標(biāo)記，并用于分子標(biāo)記輔助選擇。主要研究結(jié)果如下： 1．本研究從水平抗性材料B群體中隨機(jī)挑選了122個(gè)株系，用P.infestans混合生理小種進(jìn)行小葉離體鑒定。鑒定結(jié)果顯示，122個(gè)株系的晚疫病水平離體病級(jí)趨于正態(tài)分布。 2．根據(jù)已報(bào)道的在馬鈴薯作圖群體中已定位的分子標(biāo)

3、記，選擇與晚疫病抗性QTL緊密連鎖或源自NBS-LRR結(jié)構(gòu)的標(biāo)記，同時(shí)根據(jù)晚疫病水平抗性相關(guān)的EST等序列設(shè)計(jì)特異引物，對(duì)所選擇株系進(jìn)行標(biāo)記檢測(cè)。本實(shí)驗(yàn)共用38對(duì)候選基因特異引物進(jìn)行簡(jiǎn)單PCR擴(kuò)增。對(duì)擴(kuò)增出的帶型進(jìn)行逐步回歸分析表明，BA228d23<,90>，grol-2-P40<,500>，NL27<,250>，GP23<,600>，GP23<,1200>，R×1<,300>，GPl79<,570>，prpl<,800>8個(gè)標(biāo)記與晚

4、疫病水平抗性顯著相關(guān)。 3．從已構(gòu)建的富集晚疫病水平抗性相關(guān)基因的差減文庫中篩選目標(biāo)EST，據(jù)此設(shè)計(jì)特異引物。另根據(jù)LM—PCR的引物序列設(shè)計(jì)特異引物。將這些特異引物配合相應(yīng)的隨機(jī)引物對(duì)各株系進(jìn)行優(yōu)化的TRAP擴(kuò)增。在擴(kuò)增的帶型中，1-1650，1-1360，2-1820，2-1380，3-1500，3-1380，3-480，5-1670，5-1300，5-1100，6-820，7-1180，7-640，8-1740，8-136