THP-1巨噬細胞熱休克處理對MCP-1和IL-8表達的影響.pdf

1、研究背景:動脈粥樣硬化(AS)是一種慢性炎癥/免疫性疾病。熱休克蛋白(heat shock protein,HSP)是機體細胞在受到熱應(yīng)激或其它應(yīng)激狀態(tài)下合成增多的一類蛋白質(zhì),可誘導免疫炎癥反應(yīng),介導天然及獲得性免疫反應(yīng)。近來很多報道顯示HSP與動脈粥樣硬化的程度呈正相關(guān)。主要以HSP60、HSP70、HSP90和小分子HSP與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān),其中對HSP60與AS之間的關(guān)系研究較多,而對HSP70在AS中的作用正日益引起

2、人們的重視。最近又有研究發(fā)現(xiàn),HSP70也可能作為TLR4的內(nèi)源性配體參與 TLRs信號傳導機制,從而誘導免疫應(yīng)答,在免疫/炎癥性疾病的發(fā)生、發(fā)展中起著重要作用。HSP70和TLR4受體均是古老而重要的蛋白,均能介導免疫/炎癥反應(yīng),誘導炎性介質(zhì)(IL-1、TNF-α、IL-6、IL-8、MCP-1)等產(chǎn)生。其中,IL-8可以同MCP-1一樣促使外周血單核細胞向血管內(nèi)皮細胞黏附,并遷移至內(nèi)皮下,吞噬脂質(zhì)轉(zhuǎn)化成為泡沫細胞,導致血管平滑肌細胞

3、異常增殖,參與AS發(fā)生的病理過程。而本研究意在從熱休克出發(fā),探討對THP-1巨噬細胞表達MCP-1和IL-8的可能影響。
　　目的:體外模擬熱休克的應(yīng)激狀態(tài),探討熱休克刺激產(chǎn)生的HSP70對體外培養(yǎng)THP-1巨噬細胞TLR4/P38MAPK、TLR4/NF-κB信號通路激活后的MCP-1、IL-8表達的影響。
　　方法:在每次實驗前用160nmol/L佛波酯孵育THP-1細胞24h,使其誘導分化成巨噬細胞,換無血清培養(yǎng)基后加

4、處理因素。
　　1)常溫對照組:THP-1細胞生長于含有10％新生小牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中,37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)。再用160nmol/L佛波酯(PMA)孵育THP-1細胞24h,使其誘導分化成巨噬細胞。
　　2)熱休克處理組:THP-1巨噬細胞42℃水浴受熱1 h,37℃恢復6 h。
　　3)熱休克+抗TLR4抗體組:
　　THP-1巨噬細胞加入Anti-TLR410ug/ml2h后42

5、℃水浴受熱1 h,37℃恢復6h。
　　4)熱休克+P38抑制劑組:
　　THP-1巨噬細胞加入 P38特異性抑制劑(SB203580)20umol/ml30min后42℃水浴受熱1 h,37℃恢復6 h。
　　5)熱休克+NF-κB抑制劑組:
　　THP-1巨噬細胞加入 NF-κB特異性抑制劑(PDTC)30umol/ml30min后42℃水浴受熱1 h,37℃恢復6 h。
　　6)熱休克+抗HSP70抗

6、體組:
　　THP-1巨噬細胞加入anti-HSP702ug/ml2h后42℃水浴受熱1 h,37℃恢復6h。
　　結(jié)果:
　　熱休克處理THP-1巨噬細胞能夠上調(diào)HSP70、TLR4、P38、NF-κBMCP-1和IL-8等表達。加入抗HSP70抗體后均可下調(diào)由熱休克處理導致的TLR4、p38、NF-κB、MCP-1和IL-8表達升高。加入抗TLR4抗體熱休克處理后,HSP70表達無變化,p38、NF-κB、MCP-

7、1和IL-8表達下調(diào)。加入p38特異性抑制劑SB203580熱休克處理后 HSP70表達無變化,TLR4、NF-κB、MCP-1和IL-8表達下調(diào)。加入NF-κB特異性抑制劑 PDTC熱休克后 HSP70、TLR4和p38表達無明顯變化,MCP-1和IL-8表達下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.熱休克處理THP-1巨噬細胞后激活TLR4、p38MAPK和NF-κB信號通路、上調(diào)MCP-1和IL-8的表達是部分通過HSP70起作用。