環(huán)氧合酶在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)及其抑制劑對(duì)細(xì)胞的增殖抑制.pdf

1、研究背景和目的： 卵巢惡性腫瘤是婦科常見(jiàn)腫瘤。由于卵巢癌早期不易發(fā)現(xiàn)，患者就診時(shí)往往己處于病變晚期或有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。80％以上的卵巢惡性腫瘤為上皮性癌，來(lái)源于卵巢上皮。卵巢癌發(fā)病機(jī)制并未完全清楚，但炎癥反應(yīng)是其發(fā)生的重要因素之一。盆腔炎和子宮內(nèi)膜異位等慢性炎癥的刺激均可增加卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)；排卵和排卵后卵巢上皮的修復(fù)都有部分炎癥介質(zhì)的參與，有可能引起上皮細(xì)胞的異常增生。有研究報(bào)道口服避孕藥或妊娠等通過(guò)減少排卵量而降低卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)

2、；也有報(bào)道保留卵巢的子宮切除術(shù)和輸卵管切除術(shù)因可減少局部炎癥反應(yīng)而降低卵巢癌的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。 環(huán)氧合酶(Cyclooxygenase，COX)是一類與前列腺素合成有關(guān)的酶，是花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素前體-前列腺素H<,2>的限速酶，而前列腺素是一類重要的炎癥介質(zhì)。COX-1和COX-2是COX的一對(duì)同功酶，也是目前COX家族中研究最多的兩種酶。一度認(rèn)COX-2催化合成的前列腺素參與炎癥反應(yīng)，而COX-1不直接參與炎癥，但近年大量研究

3、報(bào)道COX-1不僅參與炎癥，并有加重炎癥的作用。 COX亞型在卵巢癌中的表達(dá)及作用仍存在一定爭(zhēng)議。有研究發(fā)現(xiàn)COX-2的表達(dá)可促進(jìn)卵巢癌細(xì)胞增殖、血管生成、抑制凋亡和轉(zhuǎn)移；大量的研究還發(fā)現(xiàn)COX-2與卵巢癌鉑類化療藥物耐藥有關(guān)。而COX-1長(zhǎng)期被人們認(rèn)為是一種結(jié)構(gòu)型酶，其作用主要是在多數(shù)組織微量恒定表達(dá)，維持機(jī)體正常生理功能，但近年有研究報(bào)道COX-1在卵巢癌中表達(dá)上調(diào)且可促進(jìn)腫瘤血管生成。由于COX-2易受機(jī)體內(nèi)外環(huán)境因素的刺

4、激誘導(dǎo)性表達(dá)，有研究發(fā)現(xiàn)在沒(méi)有接受過(guò)細(xì)胞減滅治療的卵巢癌患者表現(xiàn)為COX-1表達(dá)上調(diào)而不是COX-2，因此COX-1可能也是卵巢癌的一種腫瘤標(biāo)志物。 COX的表達(dá)可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、血管生成和抑制凋亡等，抑制這些調(diào)節(jié)途徑有望達(dá)到治療療效。COX抑制劑是一類廣泛應(yīng)用于臨床的藥物，其最初用于抗炎癥治療，如阿斯匹林，布洛芬等，是一類經(jīng)典的非甾體類消炎藥。研究發(fā)現(xiàn)非甾體類消炎藥(non-steroidal anti-inflammatory d

5、rugs，NSAIDs)可降低某些腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，如規(guī)范使用NSAIDs 10-15年可降低結(jié)直腸癌發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)40％-50％。以COX調(diào)節(jié)途徑為作用靶點(diǎn)的藥物可能開(kāi)辟腫瘤治療的新途徑。 本課題以卵巢上皮性癌細(xì)胞株SKOV-3和OVCAR-3為代表，研究COX-1和COX-2在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)情況以及使用特異性COX-1抑制劑SC-560和特異性COX-2抑制劑NS-398對(duì)卵巢癌細(xì)胞生物學(xué)特性的影響。 方法： 1

6、．Western blot法檢測(cè)COX-1和COX-2在卵巢癌細(xì)胞SKOV-3和OVCAR-3中的表達(dá)； 2．MTT法檢測(cè)不同濃度的SC-560和NS-398處理卵巢癌細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞增殖的影響； 3．流式細(xì)胞儀檢測(cè)SC-560和NS-398處理卵巢癌細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞增殖周期的影響； 4．ELISA檢測(cè)SC-560和NS-398處理卵巢癌細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞PGE<,2>合成的影響； 結(jié)果： 1．COX-1和CO

7、X-2在卵巢癌細(xì)胞中的表達(dá)COX-1在SKOV-3和OVCAR-3兩株細(xì)胞均呈陽(yáng)性表達(dá)，而COX-2只在OVCAR-3細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)。 2．不同濃度的SC-560和NS-398對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖的影響SC-560和NS-398對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)均有抑制作用。其中SC-560對(duì)OVCAR-3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制強(qiáng)于SKOV-3細(xì)胞。50 μmol/L的SC-560在24 h即可對(duì)OVCAR-3細(xì)胞的生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用，而對(duì)SKOV-3細(xì)胞的

8、生長(zhǎng)抑制作用表現(xiàn)在48 h后，所需藥物濃度也較OVCAR-3細(xì)胞大，50μmol/L對(duì)SKOV-3細(xì)胞無(wú)增殖抑制作用；作用時(shí)間24 h和48 h，NS-398對(duì)OVCAR-3細(xì)胞無(wú)生長(zhǎng)抑制，72 h時(shí)可表現(xiàn)明顯細(xì)胞增殖抑制，而對(duì)SKOV-3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制起效于48 h，所需藥物濃度較大，50 μmol/L對(duì)細(xì)胞增殖無(wú)抑制。在相同濃度作用時(shí)間相同時(shí)SC-560對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用強(qiáng)于NS-398。 3．不同濃度的SC-560和NS

9、-398對(duì)卵巢癌細(xì)胞增殖周期的影響SC-560和NS-398對(duì)SKOV-3和OVCAR-3細(xì)胞增殖周期無(wú)顯著影響(P>0.05)，但能促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡。 4．SC-560和NS-398對(duì)卵巢癌細(xì)胞PGE<,2>合成的影響SC-560和NS-398均能減少卵巢癌細(xì)胞PGE<,2>的合成。 結(jié)論： 1.COX-1在兩株卵巢上皮性癌細(xì)胞中均有陽(yáng)性表達(dá)，而COX-2僅在OVCAR-3細(xì)胞中呈陽(yáng)性表達(dá)。提示二者可能有不同的

10、表達(dá)調(diào)節(jié)途徑。COX-1和COX-2與卵巢癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。 2．特異性COX-1抑制劑SC-560和特異性的COX-2抑制劑NS-398對(duì)卵巢癌細(xì)胞生長(zhǎng)均有抑制作用，但在相同濃度、作用時(shí)間相同時(shí)SC-560對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用強(qiáng)于NS-398。 SC-560和NS-398對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)周期無(wú)明顯影響，但能加速細(xì)胞的凋亡，提示SC-560和NS-398可能通過(guò)調(diào)節(jié)凋亡途徑抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。 3．SC-560和