幾種化合物對THP-1細胞TLR-4信號傳導(dǎo)通路相關(guān)因子的影響.pdf

1、銀屑病等炎癥性皮膚病是一組與免疫紊亂密切相關(guān)的疾病，多種免疫細胞和細胞因子共同參與了炎癥性皮膚病的發(fā)病過程。細胞因子復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)以及相互調(diào)控機制均提示單一治療靶點的藥物已不適合此類疾病的治療，目前多靶點藥物在炎癥性皮膚病治療方面的研究日益成為重點。
　　 TLR-4是Toll樣受體家族的重要成員，近來研究證實TLR-4與銀屑病中天然免疫紊亂的現(xiàn)象相關(guān)聯(lián)，樹突狀細胞以及巨噬細胞在銀屑病炎癥反應(yīng)過程中起到重要的調(diào)節(jié)作用。以樹突狀細

2、胞及巨噬細胞作為銀屑病治療靶點的前景也越來越明朗。
　　 THP-1細胞是利用白血病患者血液中的單核細胞建立的細胞株，能夠分泌炎性細胞因子，并且經(jīng)誘導(dǎo)后可轉(zhuǎn)變?yōu)榫奘杉毎?。THP-1細胞是體外研究人單核-巨噬細胞功能的良好替代細胞，已在相關(guān)研究中廣泛使用。研究相關(guān)化合物對單核細胞TLR-4信號傳導(dǎo)通路的干預(yù)作用，對銀屑病等炎癥性皮膚病的治療及探究其抗炎-免疫機理具有一定意義。
　　 姜黃素是姜黃的主要活性成分，其藥理作用廣

3、、毒性低具有廣闊的藥用前景。姜黃素的多種藥理活性提示其具有作為治療銀屑病等炎癥性皮膚病藥物的潛力；鹽酸13-已基小檗堿（HB-13）和鹽酸13-已基巴馬汀（HP-13）是具有顯著抗炎作用的化合物，先前實驗已經(jīng)證實：HB-13和HP-13對角質(zhì)形成細胞中INF-γ信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑的多個環(huán)節(jié)有明顯抑制作用。本研究以人單核細胞株THP-1細胞為靶細胞，探究姜黃素、HB-13和HP-13三個化合物對人單核.巨噬細胞TLR-4信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中相關(guān)信號分

4、子及其下游因子表達的干預(yù)作用。
　　 第一章化合物對小鼠非特異性炎癥反應(yīng)的影響
　　 采用佛波酯（TPA）致小鼠鼠耳腫脹非特異急性炎癥模型，檢測姜黃素、HB-13、HP-13局部外用給藥和系統(tǒng)給藥的體內(nèi)抗炎活性。結(jié)果顯示：小鼠腹腔注射姜黃素（100mg/kg），HB-13（10mg/kg），HP-13（20mg/kg）對小鼠未產(chǎn)生無明顯毒性反應(yīng)。局部外用姜黃素（0.30 mg）、HB-13（0.38 mg）、HP-13（

5、0.36 mg），以及腹腔注射姜黃素（50、100mg/kg）、HB-13（5、10mg/kg）、HP-13（10、20mg/kg）對TPA誘導(dǎo)的小鼠鼠耳腫脹急性炎癥反應(yīng)有明顯的抑制作用，抑制率均達到50％以上。本章結(jié)果表明：無論局部外用或系統(tǒng)給予一定劑量的姜黃素、HB-13和HP-13均能產(chǎn)生明顯的抗炎作用。
　　 第二章化合物對THP-1細胞TLR-4信號傳導(dǎo)通路中信號分子表達的影響
　　 通過體外培養(yǎng)的THP-1細

6、胞，用外源性LPS作為刺激劑，用RT-PCR法檢測LPS刺激THP-1細胞后TLR-4信號傳導(dǎo)通路中IRAK1、TRAF6、NF-кB、TNF-α、IL-1β等信號分子mRNA表達情況，同時研究化合物對LPS刺激THP-1細胞后上述目的基因mRNA表達的影響。結(jié)果顯示：1μg/mL LPS處理THP-1細胞4小時后，可明顯上調(diào)TRAF6、IRAK1、NF-кB、TNF-αIL-1βmRNA的表達。藥物影響試驗結(jié)果表明，姜黃素（25、50

7、μg/ml）、HB-13（0.39、0.78μg/ml）和HP-13（1.56、3.121μg/ml）可以明顯抑制LPS誘導(dǎo)的上述目的基因mRNA的高表達，抑制率可達到90％以上。本章結(jié)果表明：11μg/ml LPS處理THP-1細胞4小時可形成TLR-4信號通路相關(guān)信號蛋白的體外誘導(dǎo)高表達模式，姜黃素、HB-13、HP-13均可干預(yù)THP-1細胞TLR-4通路中IRAK1和TRAF6基因的轉(zhuǎn)錄，進而下調(diào)下游NF-κB mRNA的表達，

8、最終影響下游細胞因子TNF-α和IL-1βmRNA的表達。
　　 第三章化合物對THP-1細胞TLR-4信號傳導(dǎo)通路下游分子表達的影響
　　 ELISA法測定化合物對LPS刺激THP-1細胞后TNF-α、IL-8、IL-1β分泌的影響。結(jié)果顯示：未經(jīng)刺激的THP-1細胞低水平表達TNF-α、IL-8、IL-1β，1μg/mL LPS刺激24h后，TNF-α、IL-8、IL-1β的表達顯著上升。姜黃素、HB-13和HP-1

9、3均能明顯抑制LPS刺激引起的TNF-α、IL-8和IL-1β的表達（P<0.05，P<0.01），IC50值約為：TNF-α：姜黃素：30.4671μg/mL，HB-13:0.2924μg/mL，HP-13:2.0182μg/mL；IL-8：姜黃素：19.0561μg/mL，HB-13:0.5132μg/mL，HP-13:1.7766μg/mL；IL-1β：姜黃素：32.9003μg/mL，HB-13:0.4547μg/mL，HP-1