HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥及其臨床表型的關(guān)聯(lián)研究.pdf

1、目的:
　　抑郁癥是一種常見的情感障礙，其核心癥狀為情緒低落、興趣缺乏以及樂趣喪失。其發(fā)病率逐年上升，預(yù)計(jì)到2020年抑郁癥的發(fā)病率將達(dá)到總?cè)丝诘?0％，成為全球第二大常見疾病。新近研究表明，抑郁癥是一種涉及多機(jī)制的復(fù)雜性疾病，是由遺傳、體質(zhì)、性格、環(huán)境等多因素引發(fā)。家系研究、雙生子和寄養(yǎng)子研究已證實(shí)了遺傳因素在抑郁癥發(fā)病中的重要作用，其遺傳度約為40％～70％，但是抑郁癥的遺傳模型是復(fù)雜的。隨著分子遺傳學(xué)的發(fā)展，著重于探索抑郁癥

2、致病基因或易感基因的研究迅速開展。
　　研究表明，5-HT3受體與人體許多復(fù)雜的功能紊亂有關(guān)，包括精神障礙、認(rèn)知功能障礙、藥物濫用、腸易激綜合征等。5-HT3受體的異常表達(dá)可影響5-HT、DA、γ-氨基丁酸、P物質(zhì)以及乙酰膽堿等神經(jīng)遞質(zhì)的釋放。HTR3A的基因位于染色體11q23，雙生子和家系的研究也表明抑郁癥的易感基因位于染色體11q23相同的區(qū)域。因此，HTR3A被認(rèn)為是抑郁癥病因和發(fā)病機(jī)制中最為重要的候選基因之一。對HTR3

3、A所進(jìn)行的關(guān)聯(lián)分析研究揭示，HTR3A基因的多態(tài)性與雙相情感障礙和重性抑郁障礙相關(guān)聯(lián)。但是目前在中國人群中尚未見到HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥的關(guān)聯(lián)性研究報(bào)道。
　　單核苷酸多態(tài)性(SNP)在人類基因組中廣泛存在，多態(tài)信息量大，易于檢測和統(tǒng)計(jì)分析，已經(jīng)成為新一代的遺傳標(biāo)記的方法。應(yīng)用SNP作為遺傳標(biāo)記來尋找復(fù)雜性疾病的遺傳危險(xiǎn)因素，發(fā)現(xiàn)與復(fù)雜性疾病相關(guān)的DNA序列上SNP位點(diǎn)，是了解引起人類疾病的復(fù)雜原因的最重要途徑之一。

4、　　因此，本研究選取高度同質(zhì)的中國北方漢族單相抑郁癥患者，檢測5-HT3A受體(HTR3A)基因的單核苷酸多態(tài)性分布，通過病例-對照關(guān)聯(lián)分析探索HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥發(fā)病的關(guān)聯(lián)性，研究基因型對患者抑郁及焦慮嚴(yán)重程度、臨床亞型程度和認(rèn)知功能的影響，為闡明HTR3A基因多態(tài)性在抑郁癥病因?qū)W中的作用，預(yù)測抑郁癥的遺傳易感性提供重要的參考依據(jù)。
　　方法:
　　本研究病例組為2012年1月～2014年3月山東省精神衛(wèi)生中心門診

5、或者住院患者，均符合DSM-Ⅳ重性抑郁障礙的診斷標(biāo)準(zhǔn)。對照組為招募的健康志愿者，其性別、年齡、文化程度與病例組相匹配。所有研究對象均為中國北方漢族血統(tǒng)。
　　入組次日抽取所有研究對象外周靜脈血。采用DNA提取試劑盒提取基因組DNA。利用飛行-時(shí)間質(zhì)譜分析(MALDI-TOF)和Sequenom MassArray平臺(tái)對HTR3A基因的10個(gè)多態(tài)位點(diǎn)(rs10789980、rs1062613、rs11604247、rs1176722

6、、rs2276302、rs1176719、rs10160548、rs1176713、rs1182457和rs897685)進(jìn)行基因型的檢測。
　　使用漢密頓抑郁量表(HAMD)和漢密頓焦慮量表(HAMA)評估病例組患者的臨床癥狀。選用連線測驗(yàn)、符號編碼測驗(yàn)、言語流暢性測驗(yàn)、數(shù)字序列測驗(yàn)、空間廣度測驗(yàn)、詞語學(xué)習(xí)測驗(yàn)、簡易視覺測驗(yàn)、迷宮測驗(yàn)、Stroop色詞測驗(yàn)和情緒管理能力測驗(yàn)等十項(xiàng)認(rèn)知測驗(yàn)評估所有研究對象的認(rèn)知功能。
　　采

7、用Plink軟件，計(jì)算基因型分布是否符合Hardy-Weinberg平衡定律，計(jì)算所有SNP位點(diǎn)的基因型頻率、等位基因頻率、比值比(OR)和95％可信區(qū)間(95％CI)。采用Haploview4.2軟件進(jìn)行連鎖不平衡和單體型分析。采用SPSS20.0軟件分析10個(gè)SNP位點(diǎn)與抑郁癥發(fā)病、抑郁癥患者的臨床表型以及認(rèn)知功能的相關(guān)性。
　　結(jié)果:
　　1.Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)
　　對病例組240例抑郁癥患者和

8、對照組232例健康志愿者HTR3A的10個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)分別進(jìn)行Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)。結(jié)果顯示，無論是病例組還是對照組，這10個(gè)位點(diǎn)的P值均＞0.05（P=0.321～0.995），表示它們均符合H-W平衡定律，說明本研究抽樣樣本符合遺傳學(xué)分析。
　　2.HTR3A SNP位點(diǎn)基因多態(tài)性與抑郁癥的關(guān)聯(lián)分析
　　(1)兩組的HTR3ASNP位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率比較
　　rs1176713位點(diǎn)的基因型頻

9、率和等位基因頻率分布在病例組和對照組中均具有顯著性差異(P＜0.05)，rs1176719位點(diǎn)的等位基因頻率分布在病例組和對照組中具有顯著性差異（P＜0.05）。
　　(2)HTR3A SNP位點(diǎn)等位基因的關(guān)聯(lián)分析
　　rs1176719位點(diǎn)的A等位基因頻率分布在病例組和對照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=5.9，P=0.015)，且OR值大于1，表明rs1176719位點(diǎn)的A等位基因與抑郁癥的發(fā)病有關(guān)聯(lián)性。
　　rs

10、1176713位點(diǎn)的C等位基因頻率分布在病例組和對照組間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.788，P=0.028)，且OR值大于1，說明1176713位點(diǎn)的C等位基因與抑郁癥的發(fā)病相關(guān)。
　　(3)不同性別病例組和對照組的各位點(diǎn)基因型頻率和等位基因頻率比較
　　rs1176719的A等位基因與男性抑郁癥的發(fā)病有顯著關(guān)聯(lián)性(OR=1.586，95％CI:1.023～2.459, STAT=2.061,P=0.039)。
　

11、　rs1062613，rs11604247，rs1176722，rs10160548，rs897685和rs1182457等六個(gè)位點(diǎn)的基因型頻率分布在男性與女性病例組和對照組間均具有顯著性差異(P＜0.05)。rs10789980和rs2276302的基因型頻率分布在男性病例組和對照組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　(4)LD和單體型分析
　　本研究所選擇HTR3A的10個(gè)SNP位點(diǎn)中多數(shù)SNP存在一定的連鎖

12、不平衡。依據(jù)病例組和對照組所有樣本共有2個(gè)單體型板塊，block1和block2，其中block1的GAG(x2=5.883，P=0.015)及AGA(x2=3.958，P=0.047)在病例組和對照組之間的差異性具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　3.HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥患者臨床表型的關(guān)聯(lián)分析
　　(1)HTR3A基因多態(tài)性與抑郁嚴(yán)重程度及HAMD各因子分的相關(guān)分析
　　不同抑郁組之間基因型和等位基因頻率分

13、布具有顯著性差異的位點(diǎn)為rs1062613,rs1176722,rs2276302,rs1176719和rs1182457(P=0.000～0.036),rs1176713位點(diǎn)不同抑郁組之間的基因型頻率分布具有顯著性差異（P＜0.05），rs11604247位點(diǎn)不同抑郁組之間的等位基因頻率分布具有顯著性差異(P＜0.05)。
　　rs1062613，rs1176722，rs1176713，rs1176719和rs10789980五

14、個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)不同基因型的HAMD因子分和總分具有顯著性差異（P＜0.05）。
　　(2)HTR3A基因多態(tài)性與焦慮嚴(yán)重程度及HAMA各因子分的相關(guān)分析
　　rs10789980，rs11604247，rs1176713和rs10160548這四個(gè)位點(diǎn)不同焦慮程度組別的基因型頻率分布具有顯著性差異(P=0.002～0.015);rs1176719，rs1176713和rs10160548這三個(gè)位點(diǎn)不同焦慮程度組別的等位基因頻率

15、分布具有顯著性差異（P＜0.05）。
　　rs1176713和rs1176719這兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)不同基因型的HAMA因子分和總分比較具有顯著性差異(P＜0.05)，其他位點(diǎn)不同基因型的HAMA總分及因子分無顯著性差異(P＞0.05)。
　　4.HTR3A基因多態(tài)性與抑郁癥患者認(rèn)知功能的關(guān)聯(lián)分析
　　(1)病例組和對照組認(rèn)知測驗(yàn)成績比較
　　除連線測驗(yàn)和簡易視覺測驗(yàn)外，病例組的各項(xiàng)認(rèn)知測驗(yàn)成績與對照組比較均具有顯著

16、性差異(P＜0.05)。
　　(2)病例組一般資料與認(rèn)知測驗(yàn)成績的相關(guān)性
　　除情緒管理測驗(yàn)外，病例組研究對象的年齡與各項(xiàng)認(rèn)知測驗(yàn)成績均具有顯著相關(guān)性(P)＜0.05)，文化程度與符號編碼測驗(yàn)成績具有顯著相關(guān)性（P＜0.05）。而性別與各項(xiàng)認(rèn)知測驗(yàn)成績均不具有顯著相關(guān)性(P＞0.05)。
　　(3)HTR3A SNP位點(diǎn)基因型與認(rèn)知測驗(yàn)成績的相關(guān)分析
　　rs10789980位點(diǎn)不同基因型的連線測驗(yàn)、詞語學(xué)習(xí)測驗(yàn)

17、、Stroop色詞和空間廣度正序測驗(yàn)成績具有顯著性差異（P＜0.05）。rs10160548位點(diǎn)不同基因型的詞語學(xué)習(xí)測驗(yàn)、簡易視覺測驗(yàn)、Stroop色詞測驗(yàn)和迷宮測驗(yàn)具有顯著性差異(P＜0.05)。其余8個(gè)位點(diǎn)不同基因型的認(rèn)知測驗(yàn)成績差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.HTR3A基因的rs1176719和rs1176713位點(diǎn)多態(tài)性可能與中國漢族人群抑郁癥發(fā)病相關(guān)，HTR3A基因可能是抑郁癥的易感基因