產(chǎn)纖維素酶微生物的分離、誘變育種及混菌發(fā)酵纖維素的研究.pdf

1、燃料乙醇是一種可替代化石能源的重要燃料。它具有廉價、清潔、環(huán)保、安全、可再生等優(yōu)點,對解決未來能源問題有著巨大的潛力和廣闊的應(yīng)用前景。因此,研究以廉價的農(nóng)作物秸稈等富含纖維素的生物廢料為原料生產(chǎn)燃料乙醇具有重要的意義。本文研究了從南京紅山動物園食草動物的糞便及土樣中分離出的14種產(chǎn)纖維素酶菌株的相關(guān)特征,以一號,二號菌株為出發(fā)菌株,經(jīng)紫外線誘變獲得了幾株高產(chǎn)纖維索酶的突變株。以稻草,毛豆殼,玉米棒為原料,利用誘變優(yōu)良菌株和酵母菌分別混菌

2、發(fā)酵生產(chǎn)燃料乙醇。 (1)從南京紅山動物園食草動物的糞便及土樣中分離出14種產(chǎn)纖維素酶菌株,分別從形態(tài),芽孢染色,鞭毛染色,革蘭氏染色,生長曲線等方面進行鑒別,對一號菌株還進行了糖發(fā)酵試驗,吲哚,甲基紅,V.P試驗,以及16S rDNA序列同源性分析。結(jié)果表明：8和13號菌株為霉菌,其余均是細菌。3,5,9,ll,14號菌株有芽孢,其余菌均未能看到芽孢,所有細菌都有鞭毛。除了8和13號菌種外,大部分都是桿狀菌,其中1,2,4,5

3、,6,7,9,10,12號菌種革蘭染色菌體呈紅色,為革蘭陰性菌；而3,ll,14號菌種為革蘭陽性菌。一號菌株的糖發(fā)酵試驗,吲哚試驗,甲基紅試驗,V.P試驗,及16S rDNA序列同源性分析結(jié)果,表明一號菌種屬于大腸桿菌屬。 (2)以一號,二號菌株為出發(fā)菌株,通過紫外線誘變處理,作出各菌株的存活率曲線圖,找出致死率分別為40％、50％、60％、70％、80％、90％的照射時間,分別按照上述時間照射菌液,涂布在纖維素剛果紅培養(yǎng)基上培

4、養(yǎng),采用透明圈法初篩和搖瓶培養(yǎng)復(fù)篩,獲得了幾株高產(chǎn)纖維素酶的突變株。其中一號菌株經(jīng)紫外線誘變處理的Q3和Q5突變株產(chǎn)酶活力最高,與出發(fā)菌株相比酶活力提高了15.8倍和12.5倍；二號菌株經(jīng)紫外線誘變處理后,變異菌株R6的產(chǎn)酶活性最高,是出發(fā)菌株的11.9倍。 (3)從甜酒曲的固體培養(yǎng)物中挑選出10個大小不等的菌落,利用淀粉發(fā)酵實驗,篩選出發(fā)酵能力較強的S6,S7,S10號酵母菌,以稻草,毛豆殼,玉米棒為原料,利用Q3,Q5這兩株